Die sleutelverskil tussen Coomassie- en silwer-kleuring is dat coomassie-kleuring 'n proteïenkleuringstegniek is wat 'n coomassie briljante blou vlek gebruik, terwyl splinterkleuring 'n proteïenkleuringstegniek is wat 'n silwer vlek gebruik.
Proteïenskeiding en identifikasie is kritieke stappe in proteoomanalise. Hulle benodig hoë-resolusie proteïen karakterisering na gelelektroforese. Daar is talle kleurtegnieke wat verskillende kleurstowwe insluit soos anioniese kleurstowwe (coomassie briljant blou), metaalkatione (imidasool-sink), silwer kleurstowwe en fluoresserende kleurstowwe, ens. Soms kan radioaktiewe probes ook gebruik word. Die keuse van die kleurtegniek hang af van die eenvoud, beskikbaarheid van beeldtoerusting in die laboratorium, ens.
Wat is Coomassie Staining?
Coomassie-kleuring is 'n proteïenkleuringstegniek wat 'n coomassie briljante blou vlek gebruik. Dit word algemeen die coomassie blou tegniek genoem. Coomassie briljante blou is die gewildste anioniese proteïenkleurstof. Hierdie vlek kleur normaalweg feitlik alle proteïene met goeie kwantitatiewe lineariteit by medium sensitiwiteit. Coomassie briljante blou vlek bind nie-spesifiek aan byna alle proteïene. Daar is twee verskillende coomassie briljante blou vlekvariante: R-250 en G-250. R-250 bied korter kleurtye, terwyl G-250 beskikbaar is in meer sensitiewe en omgewingsvriendelike formulerings.
Figuur 01: Coomassie Staining
Coomassie-kleurstowwe is baie gewild in massaspektrometriestudies en proteïenidentifikasiestudies. Bio-veilige coomassie stain is boonop 'n nie-gevaarlike formulering van coomassie blue G-250 wat tans in die mark beskikbaar is. Die voordeel van hierdie formulering is dat dit slegs water benodig om uit te spoel en te ontvlek. Bio-veilige coomassie-vlek bied sensitiwiteit gelykstaande aan konvensionele coomassie-blou G-250, maar beter as coomassie-vlek R-250. Verder het dit 'n eenvoudiger en vinniger kleurprotokol as die konvensionele Coomassie blou G-250. Die nadeel van coomassie blou kleuring is dat dit minder sensitief is in vergelyking met silwer kleuring. Coomassie blou kleuring is ongeveer 50 keer minder sensitief as silwer kleuring. Vanweë die eenvoud daarvan in binding word dit egter in baie studies verkies.
Wat is Silver Staining?
Silwerkleuring is 'n proteïenkleurtegniek wat 'n silwer vlek gebruik. Silwerkleuring word gebruik om beide agarose- en poliakrielamiedgels te kleur. Die silwerkleuring van proteïen in agarosegels is vir die eerste keer in 1973 deur Kerenyi en Gallyas ontwikkel. Later is dit aangepas vir proteïene in poliakrielamiedgels wat in SDS-PAGE gebruik word. Tans word silwerkleuring ook gebruik om DNA of RNA te kleur. Om die gels te vlek, word die gels geïnkubeer met silwernitraatoplossing in hierdie metode. Silwerkleuring vlek die plekke waar proteïene teenwoordig is van bruin tot swart.
Figuur 02: Silwerkleuring
Die intensiteit van die silwerkleuring hang af van die primêre struktuur van die proteïen. Boonop kan die netheid van die vate wat gebruik word en die suiwerheid van reagense ook die kwaliteit van silwerkleuring beïnvloed. Die nadeel van silwerkleuring is egter dat dit nie alle proteïene kan opspoor nie, veral glikoproteïene en proteïene met groot gemodifiseerde groepe wat aan hul sykettings geheg is.
Wat is die ooreenkomste tussen Coomassie- en Silwerkleuring?
- Coomassie- en silwerkleuring is twee tegnieke wat in proteïenkleuring gebruik word.
- Hulle kan beide proteïene en DNA vlek.
- Albei kleurtegnieke het nadele.
- Hierdie tegnieke het soortgelyke stappe, soos vasmaak, vlek en ontkleur.
Wat is die verskil tussen Coomassie- en Silwerkleuring?
Coomassie-kleuring is 'n proteïenkleuringstegniek wat coomassie briljante blou vlek gebruik, terwyl splinterkleuring 'n proteïenkleuringstegniek is wat silwer vlek gebruik. Dit is dus die belangrikste verskil tussen Coomassie- en silwerkleuring. Verder is Coomassie-kleuring minder sensitief as silwerkleuring.
Die onderstaande infografika lys die verskille tussen Coomassie- en silwerkleuring in tabelvorm vir vergelyking langs mekaar.
Opsomming – Coomassie vs Silver Staining
Om proteïene te visualiseer, kan 'n proteïenspesifieke kleurstofbindende of kleurproduserende chemiese reaksie uitgevoer word. Dit word proteïenkleuring genoem. Coomassie- en silwerkleuring is twee tegnieke wat in proteïenkleuring gebruik word. Coomassie-kleuringstegniek gebruik coomassie briljante blou vlek terwyl sliwerkleuring silwer vlek gebruik. Dit is dus die sleutelverskil tussen Coomassie- en silwerkleuring.
