Die sleutelverskil tussen gelfiltrasie en affiniteitschromatografie is dat gelfiltrasiechromatografie afhang van die verskille in molekulêre gewig of grootte van die analietmonster, terwyl affiniteitschromatografie afhang van die affiniteit van 'n analiet tot 'n geïmmobiliseerde ligand.
Die term chromatografie in analitiese chemie verwys na die proses van die skeiding van komponente in 'n mengsel deur verskillende tegnieke te gebruik. Chromatografie is 'n versamelnaam wat 'n verskeidenheid verskillende metodes vir skeiding verteenwoordig.
Wat is gelfiltrasiechromatografie?
Jelfiltrasiechromatografie is 'n analitiese tegniek waarin die skeiding van komponente afhang van die verskil in molekulêre gewig of grootte. Hierdie tegniek staan ook bekend as grootte-uitsluitingchromatografie of molekulêre-sifchromatografie. Die skeidingstegniek in hierdie proses hang af van die verskillende vermoë van molekules in die monster om in die porieë van die jelfiltrasiemedium in te gaan.
In die jelfiltrasietegniek bevat die stilstaande fase krale van gehidreerde, sponsagtige materiaal met porieë van molekulêre afmetings wat 'n nou reeks groottes bevat. As ons 'n waterige oplossing bestaande uit molekules van verskillende groottes deur 'n kolom wat hierdie "molekulêre siwwe" bevat, beweeg, beweeg die molekules wat groter is as die porieë van die filtrasiemedium vinnig deur die kolom. Daarteenoor gaan die kleiner molekules die porieë van die jel binne en is geneig om stadig deur die kolom te beweeg. Molekules elueer uit die kolom in volgorde van afnemende molekulêre grootte. Hier is die uitsluitingslimiet van die gel die molekulêre massa van die kleinste molekules wat nie die porieë van 'n gegewe gel kan binnedring nie.
Daar is verskillende tipes jelfiltrasietegnieke, soos indirekte jelfiltrasiemetode, bestendige jelfiltrasie, jelkraaldialise, ens. Indirekte jelfiltrasiechromatografie is nuttig in die bepaling van vrye tiroïedhormone. Bestendige gelfiltrasiechromatografie is 'n indirekte tegniek wat meestal bruikbaar is vir die meting van vrye steroïede soos kortisol, testosteroon, ens. Gelkrale-dialise, aan die ander kant, is 'n modifikasie van bestendige-toestand-gelfiltrasie wat betreklik eenvoudiger is.
Wat is affiniteitschromatografie?
Affiniteitschromatografie is 'n analitiese tegniek en 'n skeidingsmetode wat afhang van 'n spesifieke bindingsinteraksie tussen 'n geïmmobiliseerde ligand en sy bindingsvennoot. Sommige voorbeelde sluit in teenliggaam-antigeenbinding, ensiem-substraatbinding en ensiem-inhibeerderbinding. Daarom het hierdie tegniek baie belangrike toepassings in nukleïensuursuiwering, proteïensuiwering uit selekstrakte en suiwering uit bloed.
In hierdie tegniek is die belangrikste eienskap ligand-immobilisering. Ons kan verskeie materiale soos akrilate en silikagel hiervoor gebruik. Dit is belangrik om steriese interferensie van die teikenmolekule met die ligand te voorkom. Boonop is 'n inhibeerder aan die vaste fase geheg. Ons noem hierdie inhibeerder 'n spasieerder. Klassiek bestaan 'n spasieerder uit 'n koolwaterstofketting.
Die stilstaande fase van die affiniteitschromatografie bevat die kern, spasieerder en ligand. Soms het dit ook 'n metaalioon wat aan die ligand gekoppel is. Die soliede fase wat die meeste verkies word vir die stilstaande fase in hierdie tegniek is agarose gel omdat dit maklik gedoseer word om die kolom te vul en te pak met harsbeddings van enige grootte, en dit is groot genoeg vir biomolekules om vrylik in en deur die krale te vloei. Die ligande kan op verskeie maniere kovalent aan die kraalpolimeer heg. Die mees algemene spasieerverbindings is sianogeenbromied, epoksied, epoksied met C6-suur en diamin. Aan die ander kant verskil die ligand wat ons kan gebruik volgens die teiken, bv. teenliggaam-antigeen, yster- of aluminiumione-fosfoproteïene, avidien-biotien, glutathione-GST, chelator-His-gemerkte proteïene, ens.
Wat is die verskil tussen gelfiltrasie en affiniteitschromatografie?
Chromatografie is 'n belangrike analitiese tegniek. Gelfiltrasiechromatografie en affiniteitschromatografie is twee belangrike variasies van chromatografie. Die sleutelverskil tussen gelfiltrasie en affiniteitschromatografie is dat gelfiltrasiechromatografie afhang van die verskille in molekulêre gewig of grootte van die analietmonster, terwyl affiniteitschromatografie afhang van die affiniteit van 'n analiet tot 'n geïmmobiliseerde ligand.
Opsomming – Gelfiltrering vs Affiniteitschromatografie
Daar is verskillende tipes chromatografiese tegnieke volgens hul toepassing en die aard van die analietmonster. Gelfiltrasie en affiniteitschromatografie is twee sulke tipes tegnieke. Die sleutelverskil tussen gelfiltrasie en affiniteitschromatografie is dat gelfiltrasiechromatografie afhang van die verskille in molekulêre gewig of grootte van die analietmonster, terwyl affiniteitschromatografie afhang van die affiniteit van 'n analiet tot 'n geïmmobiliseerde ligand.
