Die sleutelverskil tussen sukrose-gradiënt en sukrosekussing-ultrasentrifugering is dat in sukrosegradiënt-ultrasentrifugering, 'n kontinue sukrose-gradiënt gebruik word, terwyl in sukrosekussing-ultrasentrifugering, 'n diskontinue sukrosegradiënt gebruik word.
Sukrosegradiënt en sukrosekussing-ultrasentrifugering is twee soortgelyke tipes tegnieke wat gebruik word om spesifieke tipes makromolekules te skei. In beide tegnieke word 'n sukrosedigtheidsgradiënt gebruik. Maar in sukrosegradiënt-ultrasentrifugering word 'n deurlopende digtheidsgradiënt gebruik terwyl, in sukrosekussingsultratrifugering, 'n diskontinue digtheidsgradiënt gebruik word.
Wat is sukrosegradiënt-ultrasentrifugering?
Sukrosegradiënt-ultrasentrifugering is 'n tegniek wat gebruik kan word om makromolekules soos DNA, RNA en proteïene te fraksioneer. Daar is verskeie stappe in hierdie tegniek. Dit is sukrosegradiëntbereiding, sentrifugering, skeiding en eluering. Gradiëntvoorbereiding is die sleutelstap in hierdie tegniek. In hierdie tegniek word die monster wat makromolekules van verskillende groottes bevat op die oppervlak van 'n sukrosegradiëntkolom gelaag. Tydens sentrifugering sedimenteer verskillende grootte makromolekules deur die sukrosegradiëntkolom teen verskillende tempo's. Sedimentasie hang af van verskeie faktore, insluitend die sentrifugering krag, grootte vorm en die digtheid van makromolekules, digtheid en viskositeit van die gradiënt. Aan die einde van die sentrifugering word makromolekules ruimtelik geskei deur digtheid. Groter makromolekules (hoëdigtheid makromolekules) sedimenteer na die bodem. Ligter (lae-digtheid makromolekules) bly aan die bokant van die gradiënt. Daarom skei die molekules as verskillende bande. Dan moet die bande geskei word, en die suiwering van die spesifieke makromolekule van sukrose moet gedoen word.
Figuur 01: Sukrosegradiënt-ultrasentrifugering
Aan die toepassingskant word hierdie metode wyd gebruik vir fraksionering van DNA-molekules. Sukrosegradiënt ultrasentrifugering word algemeen gebruik om proteïenkompleksgrootte en samestelling te karakteriseer. Boonop word hierdie tegniek gebruik vir die gedeeltelike suiwering van mRNA.
Wat is sukrosekussing-ultrasentrifugering?
Sukrosekussing ultrasentrifugering is nog 'n tegniek wat die fraksionering van makromolekules moontlik maak. In teenstelling met sukrose-digtheidgradiënt-ultrasentrifugering, gebruik sukrosekussing-ultrasentrifugasie 'n diskontinue digtheidsgradiënt. Die sukrosekonsentrasie verhoog van bo na onder in afsonderlike stappe. In hierdie tegniek word skeiding bewerkstellig deur die verhelderde ekstrak bo-op 'n klein volume van 'n sukrose-oplossing in 'n sentrifugebuis, die sogenaamde sukrosekussing, te plaas. Dit laat beter skeiding in hoëspoed sentrifugering toe. Wanneer die molekules as 'n band tussen die sukrosekussing skei, kan die wit band versamel en gesuiwer word. Boonop kan onsuiwerhede verder verwyder word met behulp van sukrosekussingsmetode. Met sukrosekussing kan 60-70% van die buis met die monster gevul word. Gevolglik maak die sukrosekussingsmetode dit moontlik om 'n groter volume monster te verwerk.
Wat is die ooreenkomste tussen sukrosegradiënt en sukrosekussing-ultrasentrifugering?
- Sukrosegradiënt en sukrosekussing-ultrasentrifugering is twee tegnieke wat gebruik word om 'n mengsel van makromolekules te skei.
- In beide metodes word 'n sukrosegradiënt gebruik.
- Sentrifugering is 'n stap in albei metodes.
- Die molekules sedimenteer as 'n band of sone in elke metode.
Wat is die verskil tussen sukrosegradiënt en sukrosekussing-ultrasentrifugering?
Sukrosegradiënt-ultrasentrifugering is 'n tegniek wat 'n aaneenlopende sukrosegradiënt in die sentrifugebuis gebruik, terwyl sukrosekussingsultratrifugering 'n tegniek is wat 'n diskontinue sukrosegradiënt gebruik. Dit is dus die sleutelverskil tussen sukrosegradiënt en sukrosekussing ultrasentrifugering.
Boonop laat sukrosekussingsultrasentrifugering 'n groter volume van die monster toe om geprosesseer te word, terwyl sukrosegradiënt-ultrasentrifugering 'n betreklik lae volume van die monster verwerk kan word.
Infografiese tabelle hieronder bevat meer verskille tussen sukrosegradiënt en sukrosekussing-ultrasentrifugering.
Opsomming – Sukrosegradiënt vs Sukrosekussing Ultrasentrifugering
Sukrosegradiënt ultrasentrifugering skei makromolekules deur 'n deurlopende sukrosegradiënt te gebruik. In teenstelling hiermee gebruik sukrosekussing ultrasentrifugering 'n diskontinue sukrosegradiënt om spesifieke tipe deeltjies in 'n mengsel te skei. Dus, dit is die belangrikste verskil tussen sukrosegradiënt en sukrosekussing-ultrasentrifugering. Die sukrosekussingmetode laat die versameling van morfologies ongeskonde deeltjies toe, aangesien dit nie meganiese spanning veroorsaak nie, anders as sukrosegradiënt-ultrasentrifugering, wat molekules tot onder in die buis verpletter. Boonop laat sukrosekussingsultrasentrifugering 'n groter volume van die monster toe om verwerk te word as die sukrosegradiënt-ultrasentrifugering.
