Die sleutelverskil tussen nick-vertaling en eindvulling is dat nick-translasie 'n proses is wat gemerkte DNA-probes vir verskeie hibridisasiereaksies skep, terwyl eindvulling 'n tegniek is wat stomp fragmente skep deur nukleotiede in enkelstrengige oorhange by te voeg.
Nik-vertaling en eindvulling is twee tegnieke wat in molekulêre biologie gebruik word. Nick-vertaling word gebruik vir die etikettering van probes vir hibridisasie om spesifieke nukleotiedvolgordes op te spoor. Eindvulling word gebruik om afgestompde fragmente te maak wat taai punte met enkelstrengige oorhange gehad het. Beide tegnieke is van groot belang, en hulle word gereeld in molekulêre navorsingslaboratoriums uitgevoer.
Wat is Nick Translation?
Nick-vertaling is 'n belangrike tegniek wat gebruik word om gemerkte probes voor te berei vir verskeie molekulêre biologiese tegnieke soos klad, in situ hibridisasie, fluoresserende in situ hibridisasie, ens. Dit is 'n in vitro metode van DNA-etikettering. DNA-probes word gebruik om spesifieke DNA- of RNA-volgordes te identifiseer. Met behulp van 'n gemerkte sonde kan spesifieke fragmente gemerk of gevisualiseer word vanaf 'n komplekse mengsel van nukleïensuur. Daarom word gemerkte probes voorberei met behulp van verskeie tegnieke. Nick-vertaling is een so 'n metode wat gemerkte probes produseer met behulp van DNase 1 en DNA-polimerase 1-ensieme.
Figuur 01: Nick Translation
Nick-vertalingsproses begin met DNase 1-ensiemaktiwiteit. DNase 1 stel inkepings in die fosfaatruggraat van dubbelstring-DNS in deur fosfodiesterbindings tussen nukleotiede te splits. Sodra die nick geskep is, sal vrye 3' OH-groep van die nukleotied geproduseer word, en DNA-polimerase 1-ensiem sal daarop inwerk. 5'- tot 3'-eksonuklease-aktiwiteit van DNA-polimerase 1 verwyder nukleotiede van die kerf na die 3'-rigting van die DNA-string.
Gelyktydig werk die polimerase-aktiwiteit van DNA-polimerase 1-ensiem en voeg nukleotiede by om die verwyderde nukleotiede te vervang. As die nukleotiede gemerk is, sal die vervanging deur die gemerkte nukleotiede plaasvind, en dit sal die DNS merk vir identifikasie. Laastens kan hierdie nuut gesintetiseerde gemerkte DNA as probes in verskeie hibridisasiereaksies gebruik word.
Wat is Eindvulling?
Eindvulling is 'n tegniek wat in molekulêre biologie gebruik word om stomp fragmente te maak. Beperkingsvertering produseer fragmente met oorhange. Hierdie fragmente is moontlik nie versoenbaar om in plasmiedvektore te ligeer nie. Vektore word dikwels afgestomp sodat nie-versoenbare punte verbind kan word. Daarom kan fragmente met oorhange afgestomp word deur die nukleotiede by die komplementêre string te voeg deur die oorhang as die templaat vir polimerisasie te gebruik. Hierdie proses staan bekend as eindvulling.
DNA-polimerases soos Klenow-fragment van DNA Polimerase I en T4 DNA Polimerase kataliseer die eindvulling. Hulle voeg nukleotiede by om in te vul (5′ → 3′) en terugkou (3′ → 5′). Sodra die taai punte gevul is, word hulle stomp en is hulle gereed om in 'n vektor te lig.
Verder kan eindvulling gebruik word om DNA-molekules te benoem. Dit kan egter net gebruik word om DNA-molekules met taai punte te merk. In vergelyking met nick-vertaling, is eindvulling 'n sagter metode wat selde DNA-breuke veroorsaak.
Wat is die ooreenkomste tussen Nick-vertaling en eindvulling?
- Beide nick-vertaling en eindvulling is molekulêre biologiese tegnieke.
- Hulle kan gebruik word om probes te benoem.
- Albei is in vitro
Wat is die verskil tussen Nick-vertaling en eindvulling?
Nik-vertaling is 'n tegniek wat gemerkte probes vir hibridisasie skep. In teenstelling hiermee is eindvulling 'n tegniek wat stomp fragmente skep vir afbinding in vektore. Dus, dit is die sleutelverskil tussen nick-vertaling en eindvulling. Verder vereis Nick-vertaling die gebruik van 5'tot 3'-eksonuklease-aktiwiteit, terwyl eindvulling nie 5'tot 3'-eksonuklease-aktiwiteit vereis nie.
Die onderstaande infografika tabuleer die verskille tussen nick-vertaling en eindinvulling in meer besonderhede.
Opsomming – Nick Translation vs End Vulling
Nick-vertaling is 'n metode wat radio-gemerkte nukleotiede in DNS inkorporeer. Dit sintetiseer gemerkte probes gebaseer op die aktiwiteite van DNase 1 en E. coli DNA polimerase 1 ensieme. Eindvulling, aan die ander kant, is 'n tegniek wat stomp fragmente produseer. Wanneer die fragmente taai punte (enkelstrengs oorhange) het, is dit nodig om hulle afgestomp ente te maak om in vektore te ligeer. Eindvulling voeg versoenbare nukleotiede by en skep stomp eindfragmente om hulle versoenbaar te maak vir afbinding. Dus, dit som die verskil tussen nick vertaling en eindvulling op.
