Sleutelverskil – Horisontale vs Vertikale gelelektroforese
Gelelektroforese is 'n laboratoriumtegniek wat in genetika gebruik word om mengsels wat DNA, RNA en ander proteïene bevat volgens hul onderskeie lading en molekulêre grootte te skei. DNS, RNA of proteïene wat in hierdie metode geskei moet word, word deur 'n jel gevoer wat klein porieë bevat. Die molekules word deur 'n elektriese veld deur die jel gedryf. Die molekules gaan deur die porieë van die jel, en die spoed van die beweging is omgekeerd eweredig aan hul onderskeie lengtes. Daarom sal molekules met 'n laer molekulêre grootte vinniger beweeg as molekules met 'n hoër molekulêre gewig. Die elektriese veld word gegenereer deur die verskil in lading aan twee punte van die jel. Die een kant bevat 'n positiewe lading, en die ander kant bevat 'n negatiewe lading. Aangesien DNA- en RNA-molekules negatief gelaai is, sal hulle na die positief gelaaide einde van die jel aangetrek word. Gelelektroforese kan van twee verskillende metodes wees: horisontale gelelektroforese en vertikale gelelektroforese. In horisontale gelelektroforese is die gel in 'n horisontale oriëntasie teenwoordig en word dit ondergedompel in 'n aaneenlopende lopende buffer wat in die gelboks self teenwoordig is. In vertikale jelelektroforese is die bufferstelsel vertikaal georiënteer en is diskontinu met twee kamers aan die bokant en die onderkant met onderskeidelik 'n katode en 'n anode. Dit is die sleutelverskil tussen horisontale en vertikale gelelektroforese.
Wat is horisontale gelelektroforese?
Horizontale gelelektroforese gebruik die basiese teorie vir skeiding van DNA-, RNA- of proteïenmolekules volgens hul onderskeie molekulêre grootte en lading. In hierdie tegniek is die jel in 'n horisontale oriëntasie teenwoordig en word dit ondergedompel in 'n buffer wat aaneenlopend is. Agarose-gel word gebruik om die jelboks in twee kompartemente te skei. Die een kant van die jelboks bevat 'n anode, terwyl die ander kant 'n katode bevat. Wanneer 'n stroom toegepas word, laat die buffer wat in hierdie tegniek gebruik word die skepping van 'n ladinggradiënt toe. Wanneer die lading toegedien word, is die jel geneig om warm te word. Die buffer funksioneer ook as 'n koelmiddel, wat die temperatuur op optimale vlakke handhaaf. Hersirkulasie van die lopende buffer verhoed die vorming van 'n pH-gradiënt. 'n Diskontinue bufferstelsel kan nie in horisontale gelelektroforese gebruik word nie, aangesien die twee kompartemente van die gelstelsel met die lopende buffer verbind word. Akrilamied word tydens gelelektroforese gebruik om proteïenmengsels te skei.
Figuur 01: Horisontale gelelektroforese
In horisontale gelelektroforese kan akrielamied nie gebruik word nie aangesien die jelboks aan suurstof blootgestel word. As gevolg van die teenwoordigheid van suurstof, word polimerisasie van akrielamied geïnhibeer, en dit belemmer die vorming van die gel. Horisontale gelelektroforese is 'n moeitelose metode wat gebruik word in die skeiding van DNA en RNA.
Wat is vertikale gelelektroforese?
Vertikale gelelektroforesetegniek funksioneer volgens die primêre teorie van gelelektroforese, maar dit word as meer kompleks as horisontale gelelektroforesemetode beskou. Hierdie tegniek gebruik 'n diskontinue buffer. 'n Katode is in die boonste kamer geleë, en die anode is geleë in die onderste kamer. Die elektrodes wat in elke kompartement teenwoordig is, verskaf die vereiste elektriese veld.’n Dun lagie jel word tussen die twee gemonteerde glasplate gegooi. Daarom word die boonste gedeelte van die gel in die boonste kamer ondergedompel, en die onderste gedeelte van die gel word in die kamer aan die onderkant ondergedompel. Sodra die stroom toegepas is, beweeg 'n klein gedeelte van die buffer na die onderste kamer vanaf die boonste kamer deur die jel. Die stroom wat in hierdie tegniek toegepas word, is van minuut-eenhede.
Figuur 02: Vertikale gelelektroforese
In vertikale gelelektroforese vloei buffer net deur die jel. Dit laat akkurate beheer van die gradiënt van spanning tydens die skeidingstadium toe. Akrilamiedgel kan gebruik word aangesien die kompartemente nie aan atmosferiese suurstof blootgestel word nie. As gevolg van die kleiner poriegrootte van akrielamiedgel, kan presiese skeiding met 'n hoër resolusie bereik word.
Wat is die ooreenkomste tussen horisontale en vertikale gelelektroforese?
- Albei stelsels funksioneer volgens die basiese teorie van gelelektroforese.
- Anode en katode word gebruik om die vereiste elektriese veld in beide stelsels te verskaf.
Wat is die verskil tussen horisontale en vertikale gelelektroforese?
Horizontale vs Vertikale gelelektroforese |
|
| Horizontale gelelektroforese is 'n gelelektroforesetegniek waarin die gel in 'n horisontale oriëntasie teenwoordig is. | Vertikale gelelektroforese is 'n gelelektroforesetegniek waarin die gel vertikaal georiënteer is. |
| Buffer | |
| Horizontale gelelektroforese bestaan uit 'n deurlopende buffer. | Die lopende buffer is diskontinu in vertikale gelelektroforese. |
| Gebruik van akrilamied | |
| Akrilamied kan nie vir horisontale gelelektroforese gebruik word nie, aangesien die jelboks aan atmosferiese suurstof blootgestel word. | Aangesien die jel nie aan atmosferiese suurstof blootgestel word nie as gevolg van twee aparte kamers, kan akrielamied vir vertikale gelelektroforese gebruik word. |
| Funksie | |
| Horizontale gelelektroforese word meer dikwels gebruik vir die skeiding van DNA- en RNA-mengsels, maar nie proteïene nie. | Vertikale jelelektroforese word gebruik om mengsels van proteïene te skei. |
Opsomming – Horisontale vs Vertikale gelelektroforese
Gelelektroforese is laboratoriumtegniek wat wyd gebruik word in die skeiding van mengsels wat molekules van DNA, RNA en proteïene bevat. Daar is twee metodes van gelelektroforese: horisontale en vertikale gelelektroforese. In horisontale gelelektroforese is die lopende buffer aaneenlopend, terwyl dit in vertikale gelelektroforese diskontinu is. Dit is die verskil tussen horisontale en vertikale gelelektroforese. Albei stelsels funksioneer volgens die algemene beginsel van gelelektroforese.
Laai PDF-weergawe van Horisontale vs Vertikale Gel Elektroforese af
Jy kan die PDF-weergawe van hierdie artikel aflaai en dit vir vanlyn doeleindes gebruik soos per aanhalingsnota. Laai asseblief PDF-weergawe hier af Verskil tussen horisontale en vertikale gelelektroforese.
