Die sleutelverskil tussen Klenow-fragment en DNA-polimerase 1 is dat Klenow-fragment 'n groot gedeelte van DNA-polimerase 1 is wat nie 5' tot 3' eksonuklease-aktiwiteit het, terwyl DNA-polimerase 'n ensiem van E. coli is wat al drie het. domeine insluitend 5′ tot 3′ eksonuklease-aktiwiteit.
DNA-polimerase is een van die sleutelensieme wat betrokke is by DNA-replikasie in lewende organismes. Daar is verskillende vorme van DNA-polimerase-ensiem wat in eukariote en prokariote gevind word, gebaseer op die grootte en vorm. DNA-polimerase 1, 2 en 3 word slegs in prokariotiese organismes aangetref, en hulle speel verskillende rolle in DNA-replikasie. DNA polimerase 1 het drie domeine met 5' tot 3' polimerase, 3' tot 5' eksonuklease aktiwiteit en 5' tot 3' eksonuklease aktiwiteit. Klenow-fragment is 'n proteolitiese produk van DNA-polimerase 1. Dit besit 5 tot 3'-polimerase- en 3'- tot 5'-eksonuklease-aktiwiteite van ongeskonde DNA-polimerase 1, maar dit het nie die 5'- tot 3'-eksonuklease-aktiwiteit.
Wat is Klenow Fragment?
Klenow-fragment is 'n groot gedeelte van DNA-polimerase 1. Anders as DNA-polimerase 1, word 5'- tot 3'-eksonuklease-aktiwiteit nie in Klenow-fragment gesien nie, aangesien dit nie die 5'- tot 3'-voorwaartse eksonuklease-domein het nie. Klenow-fragmente word geproduseer deur DNA-polimerase 1 te verteer met 'n protease genaamd subtilisin, wat 'n proteïenverterende ensiem is. In sommige toepassings word die 3′ tot 5′ eksonuklease-aktiwiteit van die Klenow-fragment ongewens. Dit kan verwyder word deur 'n mutasie in die geen in te bring wat die Klenow-fragment kodeer. Die resulterende ensiem wat slegs die 5'- tot 3'-polimerase-aktiwiteit het, staan bekend as die ekso-Klenow-fragment. Morfologies lyk Klenow-fragment soos die regterhand van die mens. Dit het N-terminaal 3'-5' eksonuklease domein en die C-terminale polimerase domein geskei deur ongeveer 30 A.
Figuur 01: Klenow-fragment en DNA-polimerase 1
Klenow-fragment is 'n belangrike hulpmiddel in molekulêre biologiese tegnieke. Klenow-fragmente het veelvuldige gebruike. Hulle is uiters belangrik in stomp-end kloning om stomp fragmente te produseer. Klenow-fragmente kan 3′ oorhange verwyder of 5′ oorhange vul om stomp punte te vorm. Boonop word Klenow-fragmente gebruik om dubbelstring-DNS uit enkelstringe te sintetiseer. Verder word hulle gebruik om radioaktief gemerkte probes voor te berei deur die 5'tot 3' DNA-afhanklike DNA-polimerase-aktiwiteit te gebruik.
Wat is DNA-polimerase 1?
DNA-polimerase 1 (Pol 1) is 'n ensiem wat in prokariote voorkom wat nodig is vir bakteriese DNA-replikasie. Dit is die eerste tipe DNS-polimerase wat deur Arthur Kornberg in 1956 ontdek is. Pol 1 is die volopste polimerase in E. coli. Dit word deur die geen polA gekodeer en bestaan uit 928 aminosure. Dit bestaan uit drie domeine. Al drie domeine vervul verskillende funksies. Twee domeine voer 5'- tot 3'-eksonuklease-aktiwiteit en 3'- tot 5'-eksonuklease-aktiwiteit uit. As gevolg van hierdie aktiwiteit wat Pol 1 besit, is dit gewild as 'n DNS-herstellende ensiem eerder as 'n DNS-replisering ensiem. Derde domein het die vermoë om veelvuldige polimerisasies (5′ tot 3′) te kataliseer voor die vrystelling van die sjabloon-DNA en Okazaki-fragmente met mekaar te verbind deur nuwe DNA te vul en RNA-inleiders te verwyder.
Figuur 02: DNA-polimerase
Pol 1 geïsoleer van E Coli is wyd gebruik in molekulêre toepassings. Sodra die Taq Polimerase egter ontdek is, het dit die E Coli Pol 1 in PCR-tegnologie vervang. Taq-polimerase is soort van 'n termostabiele DNA-polimerase wat aan Pol 1 behoort.
Wat is die ooreenkomste tussen Klenow-fragment en DNA-polimerase 1?
- Klenow-fragment is 'n groot gedeelte van DNA-polimerase 1.
- Hulle het 5'tot 3′ DNA-afhanklike DNA-polimerase-aktiwiteit en 3'tot 5'-eksonuklease-aktiwiteit wat proeflees bemiddel.
- Hulle word vir veelvuldige doeleindes gebruik.
Wat is die verskil tussen Klenow-fragment en DNA-polimerase 1?
Die sleutelverskil tussen Klenow-fragment en DNA-polimerase 1 is dat Klenow-fragment 5' tot 3'-eksonuklease-aktiwiteit het, terwyl DNA-polimerase 1 5'- tot 3'-eksonuklease-aktiwiteit het. Daarom het Klenow-fragment twee domeine, terwyl DNA-polimerase 1 al drie domeine het.
Infografika hieronder toon meer besonderhede van die verskil tussen Klenow-fragment en DNA-polimerase 1.
Opsomming – Klenow Fragment vs DNA Polimerase 1
DNA polimerase 1 is 'n ensiem van E. coli wat drie domeine het as 5' tot 3' polimerisasie domein, 3' tot 5' eksonuklease domein en 5' tot 3' eksonuklease domein. Klenow-fragment is 'n groot deel van DNA-polimerase. Dit het nie een domein van DNA-polimerase 1 nie, wat die 5' tot 3' eksonuklease-domein is. Die sleutelverskil tussen Klenow-fragment en DNA-polimerase 1 is dat Klenow-fragmente nie 5'- tot 3'-eksonuklease-domein het nie, terwyl DNA-polimerase 1 5'- tot 3'-eksonuklease-domein het.
