PCR teen intydse PCR
PCR of Polimerase-kettingreaksie is 'n rewolusie-ontdekking in moderne molekulêre biologie, wat die eerste keer deur die chemikus Kary Mullis in 1983 ontwikkel is. Dit laat toe dat 'n enkele volgorde in 'n komplekse DNS geamplifiseer word vir ontleding. Die basiese idee van die PCR is dat twee primers, wat komplementêr is tot die teenoorgestelde stringe van 'n DNS-volgorde, na mekaar georiënteer is; die primers produseer komplementêre stringe wat elkeen die ander primer bevat. Gevolglik is die resultaat 'n groot hoeveelheid van 'n volgorde wat ooreenstem met die DNS wat tussen die twee primers lê. DNA-polimerase-ensiem word gebruik om die primers in PCR uit te brei. DNA-polimerase is 'n termostabiele ensiem, en dit het die vermoë om te oorleef in hoë temperature (94 tot 95 °C) wat gebruik word vir denaturering van templaat-DNA.
Die PCR behels drie stappe, naamlik herhaalde rondtes van denaturering, uitgloeiing van primers en sintese van DNA. 'n Termosiklusmasjien word gebruik om hierdie reaksie uit te voer sodat dit geprogrammeer kan word om die temperature vinnig en akkuraat te verander. Toepassings van die PCR is kriminele ondersoeke, DNS-vingerafdruk, opsporing van patogene en ontleding van DNS van vroeë menslike spesies.
Wat is konvensionele PCR?
Daar is drie hoofstadia van konvensionele PCR, naamlik; DNA-amplifikasiestadium, skeiding van PCR, en opsporing van produkte. Skeiding van DNA-segmente word tipies gedoen deur agarosegelelektroforese. Die produkte word dan met etheiduimbromied gekleur. Laastens word opsporing bereik deur die visualisering van bande op gels onder UV-lig. Daarom word die finale resultate van konvensionele PKR nie as getalle uitgedruk nie. Normaalweg is die konvensionele PCR net in staat om 'n enkele parameter op te spoor.
Wat is intydse PCR?
Intydse PCR kan die versterking van produkte opspoor, aangesien die produkte gesintetiseer word. Met die ontwikkeling van tegnologie het PCR 'n baie gewilde tegniek geword, veral vir die opsporing en identifikasie van bakterieë in voedsel. Die intydse PCR gebruik 'n fluoresserende kleurstofstelsel en termosikleerder toegerus met fluoresserende opsporingsvermoë.
Wat is die verskil tussen konvensionele PCR en intydse PCR?
• Konvensionele PCR is meer tydrowend aangesien dit gelelektroforese gebruik om die versterkte PCR-produkte te analiseer. Daarteenoor is intydse PCR minder tydrowend aangesien dit versterkings tydens die vroeë fases van die reaksie kan opspoor.
• Intydse PCR versamel data by die eksponensiële groeifase van PCR terwyl tradisionele PCR data by die eindpunt van die reaksie insamel.
• Die eindpuntresultate van die konvensionele PCR is dalk nie baie akkuraat nie, maar die resultate van die intydse PCR is baie presies.
• Intydse PCR is meer sensitief as konvensionele PCR.
• Konvensionele PCR het baie swak resolusie terwyl intydse PCR baie min veranderinge kan opspoor as gevolg van die hoë resolusie.
• Eindpuntbespeuring van konvensionele PCR het 'n kort dinamiese omvang terwyl intydse PCR-bespeuring wye dinamiese omvang het.
• Anders as konvensionele PCR, word outomatiese opsporingstegnieke in intydse PCR gevind.
• Konvensionele PCR is hoogs gesofistikeerd en arbeidsintensief meer as intydse PCR.
• Anders as intydse PCR, kan konvensionele PCR nie tussen dooie en lewende bakterieë onderskei nie.
• Intydse PCR gebruik fluoresserende kleurstofstelsel om die produkte op te spoor, terwyl konvensionele PCR etidiumbromied en UV-lig gebruik om bande in die agarosegelmedium te visualiseer.
