Die sleutelverskil tussen BL21 en DH5 Alpha is dat BL21 'n protease-tekorte geneties gemanipuleerde bevoegde E. coli-sel is wat hoofsaaklik vir proteïenuitdrukking gebruik word, terwyl DH5 Alpha 'n geneties gemanipuleerde bevoegde E. coli-sel is met recA1-mutasie wat hoofsaaklik gebruik word. vir plasmiedtransformasie.
E. coli is een van die bekende organismes van keuse vir rekombinante proteïenproduksie. Dit het oor die jare die gewildste uitdrukkingsplatform geword. Dit word ook as 'n selfabriek gebruik. BL21 en DH5 Alpha is twee geneties gemanipuleerde E. coli-selle wat tans onderskeidelik vir proteïenuitdrukking en plasmiedtransformasie gebruik word.
Wat is BL21?
BL21 is 'n protease gebrekkige geneties gemanipuleerde bevoegde E.coli-sel wat hoofsaaklik vir proteïenuitdrukking gebruik word. E. coli BL21 is 'n bakteriese sel afkomstig van die B-stam. Dit het defekte van Lon-protease en ompT-buitemembraanprotease. Dit word algemeen gebruik vir rekombinante proteïenuitdrukking omdat dit normaalweg stabiliteit aan uitgedrukte proteïene bring. BL21 is nuttig vir proteïenuitdrukking met pCold I-IV DNA en pCold TF DNA. Maar hierdie bevoegde E. coli-sel is nie bedoel vir 'n proteïen-uitdrukkingstelsel wat T7-promotor soos pET-stelsel gebruik nie. Die rede hiervoor is dat BL21 nie T7 RNA-polimerase uitdruk nie. Daarbenewens word dit nie aanbeveel om vir die konstruksie of voorbereiding van plasmied te gebruik nie, aangesien dit nie recA-mutasie het nie.
Figuur 01: BL21
BL21 is vir die eerste keer in 1986 deur Studier beskryf na verskeie wysigings van B-lyn. BL21-selle het 'n tekort aan die LON-protease, wat baie vreemde proteïene afbreek. Verder ontbreek dit nog 'n geen wat kodeer vir die buitenste membraanprotease (OmpT) wie se funksie is om ekstrasellulêre proteïene af te breek. 'n Gebrek aan hierdie proteïene veroorsaak die suksesvolle produksie van vreemde proteïene in E. coli BL21-selle. Verder voorkom hsdSB-mutasie in hierdie selle vreemde DNA-metilering en ontwrigting in die BL21-selle.
Wat is DH5 Alpha?
DH5 Alpha is 'n geneties gemanipuleerde bekwame E. coli-sel met recA1-mutasie wat hoofsaaklik vir plasmiedtransformasie gebruik word. DH5 Alpha E. coli-selle is geneties gemanipuleer deur die Amerikaanse bioloog Douglas Hanahan om die doeltreffendheid van transformasie te maksimeer. DH5 Alfa-sel het drie afsonderlike mutasies: recA1, endA1 en lacZΔM15. recA1 is 'n enkelpuntmutasie wat glisien 160 vervang met en 'n asparaginsuurresidu in die recA polipeptied. Hierdie mutasie deaktiveer die aktiwiteit van die rekombinases en inaktiveer homoloë rekombinasie. endA1-mutasie inaktiveer 'n intrasellulêre endonuklease wat verhoed dat dit die ingevoegde plasmied afbreek.
Figuur 02: DH5 Alpha
Boonop maak lacZΔM15-mutasie blou-wit sifting van getransformeerde selle moontlik. Hierdie selle is bekwame selle. Hulle word dikwels met kalsiumchloriedtransformasie gebruik om die verlangde plasmied in te voeg. Dit is deur onlangse navorsing geïdentifiseer dat die DH5 Alpha-sel met die Hanahan-metode die mees doeltreffende bekwame sel vir plasmiedtransformasie was.
Wat is die ooreenkomste tussen BL21 en DH5 Alpha?
- BL21 en DH5 Alpha is twee geneties gemanipuleerde E.coli
- Albei is bekwame selle.
- Hulle bestaan uit duidelike mutasies.
- Albei het geen natuurlike habitat nie.
- Dit word gebruik vir laboratoriumdoeleindes soos uitdrukkingstudies en kloningsprosedures.
Wat is die verskil tussen BL21 en DH5 Alpha?
BL21 is 'n protease gebrekkige geneties gemanipuleerde bevoegde E. coli-sel wat hoofsaaklik vir proteïenuitdrukking gebruik word. Aan die ander kant is DH5 Alpha 'n geneties gemanipuleerde bevoegde E. coli-sel met recA1-mutasie wat hoofsaaklik vir plasmiedtransformasie gebruik word. Dus, dit is die belangrikste verskil tussen BL21 en DH5 Alpha. Verder het BL21 E. coli-sel nie recA1-mutasie nie, terwyl DH5 Alpha E. coli-sel wel recA1-mutasie het.
Die volgende infografika lys die verskille tussen BL21 en DH5 Alpha in tabelvorm.
Opsomming – BL21 vs DH5 Alpha
Die nie-patogeniese stamme van E. coli word geneties ontwikkel deur wetenskaplikes vir laboratorium-uitdrukkingstudies en kloningdoeleindes. BL21 en DH5 Alpha is twee geneties gemanipuleerde E. coli-selle. BL21 word hoofsaaklik gebruik vir proteïenuitdrukkingstudies. Aan die ander kant word DH5 Alpha hoofsaaklik vir plasmiedtransformasiedoeleindes gebruik. Dit is dus die opsomming van die verskil tussen BL21 en DH5 Alpha.
