Sleutelverskil – SDS-bladsy vs. oorspronklike bladsy
SDS en inheemse bladsy is twee tipes poliakrielamiedgelelektroforesetegnieke wat in Molekulêre Biologie gebruik word. Die belangrikste verskil tussen SDS Page en Native Page is die tipe poliakrielamiedgel wat gebruik word. In SDS Page word 'n denaturerende jel gebruik, daarom word molekules geskei op grond van hul molekulêre gewig. In teenstelling hiermee, in Native Page, word nie-denaturerende gels gebruik. Daarom word molekules geskei op grond van hul grootte, lading en vorm.
Polyacrylamide Gel Elektroforese (Page) gebruik 'n jel wat gemaak word deur akrielamiedmonomere met metileenbisakrielamied te polimeer. Die poliakrielamied is taaier en meer hittebestendig as agarose. Die poliakrielamiedgels het 'n kleiner porieë wat die doeltreffende skeiding van proteïene moontlik maak. Daar is twee hooftipes bladsyopstellings, naamlik SDS Page en Native Page. SDS Page of Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel elektroforese skei proteïene op grond van hul molekulêre gewigte. Denaturerende gels word in SDS Page gebruik. Native Page gebruik nie-denaturerende gels en skei proteïene op grond van hul grootte, lading en die vorm (3D-konformasie).
Wat is SDS-bladsy?
SDS Page is die mees algemene elektroforetiese tegniek wat gebruik word om proteïene te skei op grond van hul molekulêre gewig. Die jel word gemaak deur SDS (Sodium dodecyl sulfate), wat 'n skoonmaakmiddel is, by te voeg. SDS kunsgebitte proteïene in monomere. SDS is 'n anioniese skoonmaakmiddel. Daarom voeg dit 'n netto negatiewe lading by die proteïene binne 'n wye pH-reeks. Wanneer die netto negatiewe lading aan die proteïenmolekules oorgedra word, as gevolg van die ladingvariasie, word die komplekse strukture afgebreek. As gevolg van die negatiewe lading trek proteïene aan na die positiewe kant. Molekules met 'n laer molekulêre gewig beweeg dus vinniger op die jelmatriks en kan naby die anode waargeneem word, terwyl die hoër molekulêre gewig proteïene nader aan die putte waargeneem word.
Figuur 01: SDS-bladsy
Die SDS-binding aan die polipeptiedketting is eweredig aan sy relatiewe molekulêre massa. Daarom kan die molekulêre massa ook via SDS Page bepaal word. Die kleuring van die SDS Page gels word gedoen deur bromofenol blou kleuring. Toepassings van SDS-bladsye strek tot 'n groter mate waar dit gebruik kan word om die relatiewe molekulêre massa te skat en om die relatiewe oorvloed van proteïene in 'n proteïenmengsel te bepaal. SDS Page kan ook gebruik word om die proteïenverspreiding in 'n mengsel van proteïene te bepaal. SDS Page word ook toegepas om proteïene te suiwer en te assesseer. Dit word gebruik as 'n voorlopige prosedure vir western klad en hibridisasie, wat op sy beurt gebruik word vir proteïen kartering en identifikasie.
Wat is Native Page?
Native Polyacrylamide gel elektroforese (Native Page) gebruik 'n nie-denaturerende gel. Daarom word SDS of enige ander denaturerende middel nie by die jelmatriks gevoeg nie. In Native Page is die skeiding van proteïene gebaseer op die lading en die grootte van die proteïen. Daarom hang die mobiliteit van die proteïen af van die lading en die grootte van die proteïen.
Die lading van die proteïen hang af van die sykettings van die aminosure. As die sykettings negatief gelaai is, sal die proteïen 'n algehele negatiewe lading ontvang en omgekeerd. Proteïene behou 'n 3D-konformasie as gevolg van die vou wat plaasvind. Vouing is die gevolg van die verskillende tipes bindings in proteïene soos disulfiedbindings, hidrofobiese interaksies en waterstofbindings. Daarom, as die inheemse Bladsy by 'n neutrale pH gedra word, sal die proteïene geskei word volgens die molekulêre vorm van die proteïen. Daarom kan Native Page as 'n sensitiewe tegniek gebruik word om die verandering in lading of konformasie van die proteïen op te spoor.
Die hoofvoordeel van inheemse Bladsy is dat die proteïen wat vir die Bladsy-analise gebruik word in sy oorspronklike toestand na die Bladsy-analise herwin kan word, aangesien die proteïen nie tydens die proses versteur word nie. Native Page is 'n relatief hoë deurvloeitegniek, en die stabiliteit van die proteïen word verhoog.
Figuur 02: Inheemse bladsy
Na voltooiing van die jellopie, kan die Native Page-gel bekyk word deur met broomfenolblou of enige ander geskikte kleurreagens te kleur. Die toepassings van Native Page sluit skeiding van suurproteïene in, insluitend glikoproteïene soos menslike rekombinante eritropoïetien of die identifikasie van proteïene teenwoordig in Bees Serum Albumien (BSA).
Wat is die ooreenkomste tussen SDS-bladsy en inheemse bladsy?
- Beide SDS Page- en Native Page-stelsels gebruik poliakrielamiedgel as die matriks van die jel.
- Albei word gebruik vir skeiding en identifikasie van proteïene.
- Albei gebruik elektroforetiese mobiliteit om die verbindings te skei.
- Albei kan op 'n vertikale wyse of horisontale wyse gedoen word (meestal as vertikale bladsy-opstellings gedoen omdat die looplengte meer is).
- Die elektroforese-apparaat insluitend die jeltenk, kamme, die kragtoevoer word benodig vir die werking van beide tegnieke.
- Die visualisering van die jel kan gedoen word deur kleurmetodes in beide tegnieke.
Wat is die verskil tussen SDS-bladsy en inheemse bladsy?
SDS-bladsy vs. oorspronklike bladsy |
|
| SDS Page of Sodium-dodecyl sulfate Page skei proteïene op grond van hul molekulêre gewig, en dit gebruik 'n denaturerende jel. | Native Page gebruik nie-denaturerende gels en skei proteïene op grond van hul grootte, lading en die vorm (3D-konformasie). |
| Tipe gel | |
| 'n Denaturerende jel word in SDS-bladsy gebruik. | 'n Nie-denaturerende jel word in die oorspronklike bladsy gebruik. |
| Teenwoordigheid van SDS | |
| SDS is teenwoordig as 'n skoonmaakmiddel om 'n negatiewe lading op die monster in SDS-bladsy te gee. | SDS is nie teenwoordig in die oorspronklike bladsy nie. |
| Skeidingsbasis | |
| Skeiding van proteïene hang af van die molekulêre gewig van die proteïen in SDS-bladsy. | Skeiding hang af van die grootte en vorm van die proteïenmolekule in die oorspronklike bladsy. |
| Stabiliteit van die proteïen | |
| Stabiliteit van die proteïen is laag in SDS-bladsy. | Stabiliteit van proteïen is hoog in die oorspronklike bladsy. |
| Herstel van die oorspronklike proteïen | |
| Nie moontlik nie aangesien dit in SDS-bladsy gedenatureer is. | Moontlik op die oorspronklike bladsy. |
Opsomming – SDS-bladsy vs. oorspronklike bladsy
SDS Page en Native Page is twee tipes poliakrielamied-gelelektroforesetegnieke wat gebruik word om proteïene te skei. SDS Page word behandel met 'n skoonmaakmiddel genaamd SDS. SDS gee 'n algehele negatiewe lading aan die proteïen, wat dan lei tot die denaturering van die proteïen. Daarom word die proteïene geskei op grond van hul molekulêre gewig. Daarteenoor gebruik die Native Page-tegniek geen denatureringsmiddel nie. Die proteïene word dus óf geskei op grond van hul grootte óf die vorm. Dit is die verskil tussen SDS-bladsy en oorspronklike bladsy.
