Sleutelverskil – Vorentoe vs Omgekeerde Primer
Polymerase-kettingreaksie (PCR) is 'n DNA-amplifikasiemetode wat in molekulêre biologiese toepassings gebruik word. Dit is 'n algemeen gebruikte tegniek wat miljoene tot biljoene kopieë van 'n besonder belangstellende DNS-volgorde maak. Dit is 'n in vitro metode wat in laboratoriums uitgevoer word. PCR-tegniek is totaal afhanklik van die kommersieel vervaardigde DNA-polimerase genaamd Taq-polimerase. En dit verg ook verskeie ander komponente en behoorlike temperatuurinstandhouding. Een belangrike komponent is primers. Primers is die kort DNS-volgordes wat spesifiek ontwerp is vir die teiken DNS-volgorde. Hulle is gewoonlik ongeveer 20 nukleotiede lank. Taq-polimerase kataliseer die byvoeging van nukleotiede in voorafbestaande nukleotiedvolgorde. Daarom word primers gedien as beginpunte van die sintese van nuwe stringe. Taq-polimerase werk slegs in 5' tot 3'-rigting, dus vind die DNA-sintese in dieselfde 5' tot 3'-rigting plaas. Aangesien DNA dubbelstrengs is, is twee tipes primers nodig in PCR. Hulle staan bekend as voorwaartse primer en reverse primer. Voorwaartse en terugwaartse primers word genoem op grond van die rigting van die verlenging van die primer in DNA wanneer DNA-sintese plaasvind. Voorwaartse primer gloei met die antisense DNA-string en begin die sintese van +ve-string van die geen in 5' tot 3'-rigting. Omgekeerde primer uitgloei met die sintuigstring en begin die sintese van die komplementêre string van die koderende string; wat -ve die string van die geen in 5'tot 3'-rigting. Dit is die sleutelverskil tussen voorwaartse en terugwaartse primers.
Wat is 'n Forward Primer?
Voorwaartse oriëntasie is die sintese van die koderende string of die sinstring van 'n geen. Taq-polimerase kataliseer die sintese van 'n nuwe string in 5' tot 3'-rigting. Die sintese van koderende string vind plaas wanneer die primer uitgloei met die niekoderende of die antisense string en in 5' tot 3' rigting verleng.
Figuur 01: Voorwaartse en omgekeerde primers
Die primer wat gloei met die antisense-string of die niekoderende string of die sjabloon-string staan bekend as voorwaartse primer aangesien vorentoe primer dien as 'n beginpunt vir die sintese van kodering of die positiewe string van die geen. Voorwaartse primer het 'n kort nukleotiedvolgorde wat komplementêr is tot die 3' flankerende einde van die antisense string. Dit hibridiseer met die antisense-string en fasiliteer die Taq-polimerase om nukleotiede by te voeg wat aanvullend tot die templaatstring is.
Wat is 'n Reverse Primer?
Omgekeerde primer is die kort DNS-volgorde wat met die 3'-punt van die sintuigstring of die koderende string uitgloei. Omgekeerde primer dien as die beginpunt om 'n komplementêre string van die koderende volgorde of die nie-koderende volgorde te sintetiseer. Omgekeerde primer is aanvullend tot die 3' einde van die koderingsstring ontwerp. Gevolglik uitgloei dit met die flankerende 3'-kant van die koderende string en laat Taq-polimerase toe om die antisense-string of die sjabloonstring te sintetiseer. Aangesien sy oriëntasie op 'n omgekeerde manier is, word hierdie onderlaag as omgekeerde onderlaag gemerk.
Beide terugwaartse en voorwaartse primers is belangrik vir die produksie van miljoene tot biljoene kopieë van spesifieke streke van DNS wat geteiken of geïnteresseerd is.
Wat is die ooreenkomste tussen Voorwaartse en Omgekeerde Primer?
- Beide voorwaartse en omgekeerde primers word van oligonukleotiede gemaak.
- Beide voorwaartse en omgekeerde primers besit kort nukleotiedvolgorde komplementêr tot die flankerende punte van die DNA-dubbelstringe.
- Beide Voorwaartse en Terugwaartse primers bestaan gewoonlik uit 20 nukleotiede.
- Beide voorwaartse en omgekeerde primers word gebruik in polimerase kettingreaksies.
- Beide voorwaartse en omgekeerde primers word kommersieel gesintetiseer.
- Beide voorwaartse en omgekeerde primers is temperatuurbestendig en hulle het gewoonlik soortgelyke Tm.
- Beide voorwaartse en omgekeerde primers word uitgegloei met die teiken-DNS-volgordes.
- Beide voorwaartse en omgekeerde primers is ontwerp volgens die PCR-reaksies.
- Beide voorwaartse en omgekeerde primers word as beginpunte vir die DNA-amplifikasie gedien.
- Beide terugwaartse en voorwaartse primers is belangrik vir die vervaardiging van miljoen kopieë van spesifieke streke van geteikende of geïnteresseerde DNS-volgordes.
Wat is die verskil tussen Voorwaartse en Omgekeerde Primer?
Forward Primer vs Reverse Primer |
|
| Forward primer is die kort DNS-volgorde wat hibridiseer met die 3'-punt van die niekoderende of die templaatstring van die geen en dien as die beginpunt om die koderende volgorde te sintetiseer. | Reverse primer is die kort DNS-volgorde wat met die 3'-punt van die kodering of die nie-template-string hibridiseer en dien as die beginpunt om die nie-koderende volgorde te sintetiseer. |
| Uitgloeistrand | |
| Voorwaartse primer uitgloei met sjabloonstring. | Omgekeerde primer uitgloei met die nie-sjabloonstring. |
| Gevolglike nuwe reeks | |
| Forward primer fasiliteer die sintese van die koderingsvolgorde. | Omgekeerde primer vergemaklik die sintese van die niekoderende volgorde. |
Opsomming – Vorentoe vs Omgekeerde Primer
Daar is twee tipes primers betrokke by PCR-tegniek. Hulle is vorentoe en agtertoe primers. Gebaseer op die verlenging van die primer in nuwe DNA-stringsintese, word hierdie primers gemerk of benoem. Taq-polimerase sintetiseer die nuwe DNA in 5' tot 3'-oriëntasie. Daarom word primers ontwerp as aanvullend tot 3'-punte van die dubbele stringe. Voorwaartse primer wat in 5' tot 3' rigting verleng, hibridiseer met die 3' einde van die antisense of die sjabloon of die niekoderende volgorde. Dit dien as die beginpunt om koderingsvolgorde te sintetiseer. Omgekeerde primer wat in 5' tot 3' rigting verleng, hibridiseer met die 3' einde van die kodering of die nie-template of die sinstring. Dit dien as die beginpunt om die nie-koderende volgorde te sintetiseer. Dit is die verskil tussen voorwaartse en terugwaartse primer.
