Sleutelverskil – Nitrosellulose vs PVDF
Western blotting is 'n metode wat opsporing en kwantifisering van spesifieke proteïene uit 'n proteïenmonster moontlik maak. Betroubaarheid van die tegniek hang af van die keuse van 'n korrekte membraan vir die absorpsie van proteïene uit die gel. Daar is verskillende tipes mikroporeuse membrane. Nitrosellulose- en PVDF-membrane is twee sulke membrane wat deur die navorsers verkies word as gevolg van hul spesiale eienskappe bo die ander tipes membrane. Die seleksie tussen die nitrosellulose of PVDF is ook nog 'n uitdaging in western klad. Beide nitrosellulose en PVDF het 'n hoë proteïenabsorpsiekapasiteit. Die sleutelverskil tussen nitrosellulose en PVDF-membraan is dat nitrosellulose-membrane nie die vermoë het om teenliggaampies af te stroop en die membraan te hergebruik vir teenliggaampies nie, terwyl PVDF-membrane strop- en hergebruikvermoë het.
Wat is Nitrocellulose?
Nitrosellulose is 'n polimeer wat vervaardig word deur sellulose met salpetersuur te behandel en word gebruik om mikroporeuse membrane in molekulêre biologie te maak, veral vir kladtegnieke soos suidelike, noordelike en westelike klad. Poriegroottes van nitrosellulosemembrane wissel van 3 tot 20 µm. Nitrosellulose mikroporeuse membrane vergemaklik die opsporing van immunochemiese reaksie wat op die oppervlak van die membraan plaasvind. Daarom word nitrosellulose membrane gereeld gebruik vir immobilisering van proteïene en opsporing van spesifieke proteïene in westerse klad. Nitrosellulosemembrane kan ook glikoproteïene en nukleïensure immobiliseer.
Nitrosellulosemembrane word verkies in laterale vloeitoetse as gevolg van verskeie kenmerke. Nitrosellulose membrane absorbeer proteïene teen 'n hoë konsentrasie. Die oplosmiddel wat gebruik word om die membraan te benat, verminder nie die nitrosellulose membraanproteïenabsorpsie nie. Nitrosellulosemembrane kan maklik tot die verlangde gelgrootte gesny word en proteïene van die gel na die membraan oordra deur elektriese of kapillêre oordrag. Nitrosellulose laat vinniger vloei van proteïene deur die membraan met hoë bindingspotensiaal toe. Nitrosellulose toon 'n verbeterde sterkte van hantering. Nog 'n spesiale eienskap van nitrosellulose-membraan is dat dit maklik met nie-oplosmiddel-waterbestande kleefmiddels op verskeie plastiek-agtergronde vasgeplak kan word.
Figuur 01: Nitrosellulose-membraan vir westerse klad
Wat is PVDF?
Polyvinielideendifluoried (PVDF) is fluoropolimeer wat geproduseer word deur die polimerisasie van vinielideendifluoried en het 'n hoë immobilisasievermoë van proteïene. Daarom word mikroporeuse membrane gemaak van PVDF in westerse kladtegnieke gebruik om spesifieke proteïene uit die mengsels van proteïene te ontleed. PVDF-membrane kan ook gebruik word vir aminosuuranalise en proteïenvolgordebepaling. Die belangrikste eienskap van PVDF-membraan bo nitrosellulose-membraan is dat dit maklik van die teenliggaampies gestroop kan word en hergebruik kan word vir daaropvolgende teenliggaampies.
PVDF-membrane is dikker as nitrosellulose-membrane; dus meer bestand teen skade tydens hergebruik. PVDF-membrane is hoogs hidrofobies. Daarom moet hulle in metanol of isopropanol geweek word voor gebruik.
Wat is die verskil tussen nitrosellulose en PVDF?
Nitrocellulose vs PVDF |
|
| Nitrosellulose is 'n polimeer wat uit sellulose bestaan. | PVDF is 'n fluoropolimeer wat deur die polimerisasie van vinielideendifluoried vervaardig word. |
| Membraanporiegrootte | |
| Tipiese poriegroottes is 0.1, 0.2 of 0.45μ | Tipiese poriegroottes is 0.1, 0.2 of 0.45μm |
| Proteïenbindingskapasiteit | |
| Nitrosellulose het 'n proteïenbindingskapasiteit van 80 tot 100 μg/cm2. | PVDF het 'n proteïenbindingskapasiteit van 170 tot 200 μg/cm2. |
| Sensitiwiteit | |
| Dit het 'n lae sensitiwiteit in vergelyking met PVDF. | Dit het 'n hoë sensitiwiteit. |
| Bespeuring van laaguitgedrukte proteïene | |
| Aangesien die sensitiwiteit laag is in nitrosellulosemembrane, is dit nie geskik vir opsporing van laaguitgedrukte proteïene nie. | Dit is meer geskik vir die opsporing van laaguitgedrukte proteïene vanweë die hoë sensitiwiteit daarvan. |
| Agtergrondgeraas | |
| Dit het laer agtergrondgeraas | Dit het hoër agtergrondgeraas. |
| Interaksies met proteïene | |
| Proteïenmolekules bind aan nitrosellulosemembrane deur hidrofobiese interaksies. | Proteïene bind aan PVDF-membrane deur hidrofobiese en dipoolinteraksies. |
| Aard van die Membraan | |
| Nitrosellulose is bros en broos. Weergawes van nitrosellulose is egter beskikbaar, en hulle is bestand. | PVDF is meer duursaam en het hoër chemiese weerstand. |
| Vermoë om te stroop en te hergebruik | |
| Nitrosellulose kan dalk sukkel om te stroop en te herprobeer sonder om die sein te verloor. | PVDF is ideaal vir herprobering en volgordebepaling van toepassings. |
| Geskiktheid | |
| Nitrocellulose is ideaal vir die opsporing van lae molekulêre gewigproteïene. | PVDF is meer geskik vir die opsporing van proteïene met hoër molekulêre gewig. |
| Ander gebruike | |
| Nitrosellulose kan gebruik word vir nukleïensuuranalise en kolletjie/gleuf-klatting. | PVDF kan gebruik word vir proteïenvolgordebepaling en vastefase-toetsstelsels. |
| Koste | |
| Dit is goedkoper as PVDF-membrane. | Dit is duurder as nitrosellulosemembrane. |
| Behoefte aan voorafbenatting | |
| Nitrosellulosemembrane hoef nie vooraf met metanol geweek te word nie | PVDF-membrane vereis voorafweek met metanol. |
Opsomming – Nitrosellulose vs PVDF
Nitrosellulosemembrane was die eerste membrane wat kommersieel gebruik is vir laterale vloeitoets. Hulle het 'n hoë kapasiteit om proteïene te absorbeer. Daarom word nitrosellulose membrane gebruik in westerse klad. PVDF is 'n ander tipe membraan wat in westerse klad gebruik word en dit het ook 'n hoë proteïenabsorpsiekapasiteit. Beide tipes word gebruik in western klad vir proteïenontleding. PVDF-membrane het egter meer spesiale eienskappe, wat hulle meer geskik maak as nitrosellulose-membrane vir westerse klad. Maar nitrosellulose membrane is meer geskik vir die opsporing van lae molekulêre gewig proteïene, PVDF membrane is meer geskik vir die opsporing van hoë molekulêre gewig proteïene. Dit is die verskil tussen nitrosellulose en PVDF-membrane.
