Sleutelverskil – Nitrocellulose vs Nylon Membraan
Blotting is 'n belangrike tegniek vir die opsporing van spesifieke volgordes van DNA, RNA en proteïene uit hul mengsels in molekulêre biologie. Dit word gedoen met behulp van 'n membraan genaamd klad. Daar is verskillende kladtegnieke soos noordelike, suidelike en westelike klad. Die keuse van 'n behoorlike membraan vir die kladproses moet versigtig gedoen word om nie-spesifieke binding en verkeerde opsporing te voorkom. Nitrosellulose, nylon en PVDF is algemeen gebruikte membrane in kladtegnieke. Hulle het verskillende eienskappe. Die belangrikste verskil tussen nitrosellulose en nylonmembraan is dat nitrosellulosemembrane 'n hoë proteïenimmobiliseringspotensiaal het, terwyl nylonmembrane 'n hoë nukleïensuurimmobiliseringspotensiaal het. Beide tipes membrane word egter gereeld in kladtegnieke gebruik.
Wat is 'n Nitrosellulose Membraan?
Nitrosellulose-membraan is 'n algemeen gebruikte membraanfilter in nukleïensuur- en proteïenklattegnieke. Dit het 'n hoë proteïenbindingspotensiaal. Daarom word nitrosellulose-membrane wyd gebruik in die Westerse kladtegniek. Nitrosellulosemembrane is versoenbaar met alle hibridisasietegnieke en toon voortreflike bindingsvermoë sonder steurings. Nitrosellulose membrane is natuurlik hidrofiel van aard. Hulle maak hidrofiele interaksie met molekules en immobiliseer hulle doeltreffend op die membraan. Kommersiële nitrosellulose membrane is beskikbaar in twee poriegroottes: 0,45 en 0,2 µm.
Figuur 01: Nitrosellulose-membraan wat in westerse klad gebruik word
Wat is 'n Nylon Membraan?
Nylonmembraan is nog 'n soort kommersiële membraan wat in kladtegnieke gebruik word. Dit word alternatiewelik saam met nitrosellulose membrane gebruik vir suidelike en noordelike klad. Nylonmembrane is ideaal vir suidelike klad as nitrosellulose vanweë hul hoë affiniteit vir binding met DNA. As gevolg van verskeie unieke kenmerke van nylon membrane, gebruik navorsers gewoonlik nylon membrane vir suidelike en noordelike klad in plaas van oor nitrosellulose membraan. Nylonmembrane word ook aanbeveel vir stroping en herprobering, anders as nitrosellulose.
Figuur 02: Nylonmembraan wat gebruik word vir suidelike klad
Wat is die verskil tussen Nitrocellulose en Nylon Membraan?
Nitrocellulose vs Nylon Membraan |
|
| Nitrosellulose-membrane is bros. | Nylonmembrane is minder bros. |
| Handling | |
| Hulle is moeilik om te hanteer. | Hulle is maklik om te hanteer. |
| Reprobing | |
| Onondersteunde nitrosellulose-membrane is moeilik om te herondersoek. | Herprobing is maklik met nylonmembrane. |
| Verenigbaarheid met verskeie bergingvoorwaardes | |
| Nitrosellulose-membrane het minder sterkte om verskeie bergingstoestande te weerstaan. | Nylonmembrane reageer sterker op verskeie bergingstoestande. |
| Gebruik | |
| Voornatmaak word vereis. | Voorbenatting is nie nodig vir nylonmembrane nie. |
| hidrofiele natuur | |
| Nitrosellulosemembrane is hidrofiel van aard, maar is minder hidrofiel as nylonmembrane. | Hulle is hoogs hidrofiel van aard. |
| Immobilisasiepotensiaal | |
| Nitrosellulose-membrane het minder affiniteit vir nukleïensure. Maar dit het 'n hoë affiniteit vir proteïene. | Nylonmembrane het 'n hoë bindingspotensiaal met nukleïensure as nitrosellulosemembrane. |
Opsomming – Nitrocellulose vs Nylon Membraan
Nitrosellulose- en nylonmembrane is spesiale velle wat in kladtegniek gebruik word om die bandpatroon op die jel weer te gee. Hulle maak die moontlikheid moontlik om 'n spesifieke volgorde of 'n proteïen uit die mengsels op te spoor deur dit op die membraan te immobiliseer. Sodra die molekules op die membraan geïmmobiliseer is, kan dit gebruik word as 'n substraat vir hibridisasie-analise met gemerkte probes. Nitrosellulose-membraan word algemeen gebruik vir proteïenopsporing in westerse kladtegniek as gevolg van sy hoë bindingsaffiniteit met proteïene. Nylon membrane word dikwels gebruik vir suidelike en noordelike klad. Dit is die verskil tussen nitrosellulose en nylonmembraan.
