Die sleutelverskil tussen affiniteit- en ioonuitruilchromatografie is dat ons affiniteitschromatografie kan gebruik om gelaaide of ongelaaide komponente in 'n mengsel te skei, terwyl ons ioonuitruilchromatografie kan gebruik om gelaaide komponente in 'n mengsel te skei.
Chromatografie is 'n tegniek wat ons kan gebruik om die verlangde komponente in 'n mengsel te skei. Daar is verskillende tipes soos vloeistofchromatografie, gaschromatografie, ens. Die affiniteitschromatografie en ioonuitruilchromatografie is twee subkategorieë van vloeistofchromatografie. Ook in hierdie tegnieke is daar twee fases. Hulle is naamlik die stilstaande fase en mobiele fase. Die doel van hierdie tegnieke is om die komponente, afhangende van die binding van die komponente, in die mobiele fase op die oppervlak van die stilstaande fase te skei.
Wat is affiniteitschromatografie?
Affiniteitschromatografie is 'n biochemiese tegniek wat ons gebruik om komponente in 'n mengsel te skei, afhangende van die interaksies tussen hierdie komponente.
Die interaksies wat ons in hierdie geval gebruik, sluit die volgende in:
- Antigeen-teenliggaam-interaksies
- Ensiem-substraat-interaksies
- Reseptor-ligand-interaksies
- Proteïen-nukleïensuurinteraksies
In hierdie tegniek gebruik ons die molekulêre eienskappe van molekules vir hierdie skeidingstegniek. Hier laat ons die gewenste verbinding toe om met 'n stilstaande fase te reageer deur waterstofbinding, ioniese interaksie, disulfiedbrûe, hidrofobiese interaksie, ens. Die molekules wat nie met die stilstaande fase in wisselwerking tree nie, sal eerste elueer. Ons kan dit dus van die mengsel skei. Die gewenste verbinding sal aan die stilstaande fase geheg bly. Daarom kan ons dit met 'n eluerende oplosmiddel losmaak en dit laat elueer om dit ook te skei.
Figuur 01: 'n Chromatografiese Kolom
Affiniteitschromatografie is nuttig om 'n stof uit 'n mengsel te suiwer en te konsentreer deur 'n bufferoplossing te gebruik. Dit is ook nuttig om die ongewenste stowwe in 'n mengsel te verminder. Wanneer ons die apparaat oorweeg wat ons vir hierdie proses gebruik, moet ons 'n kolom gebruik wat gevul is met ons stilstaande fase. Dan moet ons die mobiele fase laai wat die biomolekules bevat wat ons gaan skei. Laat hulle dan toe om met die stilstaande fase te bind. Daarna, met behulp van 'n wasbuffer, kan ons die nie-teiken-biomolekules skei, maar die teikenmolekules moet 'n hoë affiniteit vir die stilstaande fase hê om die skeidingsproses te slaag.
Wat is Ioonuitruilchromatografie?
Ioonchromatografie is 'n vorm van vloeistofchromatografie waarin ons ioniese stowwe kan ontleed. Dikwels gebruik ons dit om anorganiese anione en katione (d.w.s. chloried- en nitraat-anione en kalium, natriumkatione) te ontleed. Alhoewel dit minder algemeen is, kan ons organiese ione ook ontleed. Boonop kan ons hierdie tegniek gebruik vir die suiwering van proteïene omdat proteïene gelaaide molekules by sekere pH-waardes is. Hier gebruik ons 'n soliede stilstaande fase waaraan die gelaaide deeltjies kan heg. Ons kan byvoorbeeld die hars polistireen-divinielbenseen kopolimere as die vaste ondersteuning gebruik.
Figuur 02: Fases van ioonuitruilchromatografie
Om dit verder te verduidelik, het die stilstaande fase gefixeerde ione soos sulfaatanione of kwaternêre amienkatione. Elkeen hiervan behoort te assosieer met 'n teenioon ('n ioon met teenoorgestelde lading), as ons die neutraliteit van hierdie sisteem wil handhaaf. Hierin, as die teenioon 'n katioon is, noem ons die stelsel as 'n katioonuitruilhars. Maar as die teenioon 'n anioon is, is die sisteem 'n anioonuitruilhars.
Daar is vyf hooffases in 'n ioonuitruilproses;
- Aanvanklike stadium
- Adsorpsie van teiken
- Begin van eluering
- Einde van eluering
- Regeneration
Wat is die verskil tussen affiniteit- en ioonuitruilchromatografie?
Affiniteitschromatografie is 'n biochemiese tegniek wat ons gebruik om komponente in 'n mengsel te skei, afhangende van die interaksies tussen hierdie komponente, terwyl ioonchromatografie 'n vorm van vloeistofchromatografie is waarin ons ioniese stowwe kan analiseer. Daarom is die groot verskil tussen affiniteit- en ioonuitruilchromatografie dat ons ioonuitruilchromatografie slegs vir die skeiding van ioniese stowwe kan gebruik, terwyl die affiniteitschromatografie in staat is om beide gelaaide en ongelaaide deeltjies te skei. Wanneer die werkbeginsel oorweeg word, is die verskil tussen affiniteit- en ioonuitruilchromatografie dat die affiniteitschromatografie voortgaan as gevolg van die feit dat teikenmolekules 'n hoë affiniteit vir die stilstaande fase het. Vir ioonuitruilchromatografie het teikenmolekules egter 'n teenoorgestelde lading as dié van die stasionêre fase-oppervlak.
Die onderstaande infografika bied die verskil tussen affiniteit- en ioonuitruilchromatografie aan as 'n vergelyking langs mekaar.
Opsomming – Affiniteit vs ioonuitruilchromatografie
Opsommend, affiniteit en ioonuitruilchromatografie is twee vorme van vloeistofchromatografiese tegnieke. Die sleutelverskil tussen affiniteit- en ioonuitruilchromatografie is dat ons affiniteitschromatografie kan gebruik om gelaaide of ongelaaide komponente in 'n mengsel te skei, terwyl ons ioonuitruilchromatografie kan gebruik om gelaaide komponente in 'n mengsel te skei.
