Sleutelverskil – Benzonase vs DNase
Degradasie van nukleïensure is belangrik vir baie molekulêre biologie tegnieke. Dit word wyd gebruik in rekombinante DNA-tegnologie om van ongewenste fragmente van DNA en RNA ontslae te raak. Daar word na nukleïensuurafbrekende ensieme verwys as Nukleases, en hulle kan van verskillende tipes wees gebaseer op die vereiste funksie. Nukleases wat DNA afbreek, staan bekend as DNases, terwyl die wat RNA afbreek, bekende RNases is. Hierdie ensieme word meestal gebruik in in vitro eksperimente waar in vitro molekulêre toetse uitgevoer word om suiwer DNA, RNA of proteïene te isoleer. Bensonases is 'n tipe nukleases wat beide DNA en RNA afbreek, terwyl DNases slegs DNA afbreek. Dit is die sleutelverskil tussen Benzonase en DNase.
Wat is Benzonase?
Benzonase is is 'n geneties gemanipuleerde endonuklease van Serratia marcescens. Hierdie ensiem word op industriële skaal in E. coli-gashere geproduseer. Bensonase is in staat om dubbelstrengs DNA, lineêre DNA, sirkelvormige DNA en enkelstrengs RNA te splits. Bensonase is dus kommersieel belangrik. Bensonase-ensiem is 'n proteïendimeer wat 245 identiese aminosure het, ~30 kDa subeenhede met twee noodsaaklike disulfiedbindings. Bensonase klief nukleïensure aan sy 5'-punte en lei tot fragmente met vrye 5'-punte. Bensonase kan nukleïensure in enige volgorde klief, maar verkies GC-ryke streke.
Benzonase word gestoor teen -20 0C. Die optimum pH vir ensiemaktiwiteit is gevind as 8.0 – 9.2. Die toepassings van Benzonase sluit in monstervoorbereiding vir proteïen 2D-gelelektroforese waar Benzonase gebonde nukleïensure en die verwydering van nukleïensuurkontaminante van rekombinante proteïenpreparate verwyder. Dit word ook gebruik om die viskositeit van proteïenekstrakte te verminder en te voorkom dat selle in 'n selmengsel saamklonter word.
Wat is DNase?
DNase is 'n nuklease, hidrolitiese ensiem wat slegs in staat is om dubbelstring-DNS te splits. Daar is twee hooftipes DNases: DNase I en DNase II. DNase I neem deel aan die splitsing van dubbelstring-DNS om polinukleotiede met 5'-vrye punte te produseer. DNase II is betrokke by die splitsing van dubbelstring-DNS om polinukleotiedstringe met 3'-vrye ente of oorhange te produseer.
DNase I
DNase I funksioneer teen 'n optimum pH tussen 7.0 – 8.0. Die ensiemaktiwiteit hang af van baie ioniese kofaktore wat insluit, Ca2+, Mg2+ of Mn2+Die aktiwiteit van Mg2+ en Mn2+ bepaal die funksie van die DNase I. In die teenwoordigheid van Mg 2+, DNase I kloof elke string van dsDNA onafhanklik. Dit vind op 'n lukrake wyse plaas. In teenstelling hiermee, in die teenwoordigheid van Mn2+, , klief die ensiem albei DNA-stringe op ongeveer dieselfde plek. Hierdie splitsing sal lei tot die vervaardiging van twee tipes DNS-fragmente; een tipe met stomp punte en 'n ander tipe met een of twee nukleotiedoorhange.
Figuur 02: DNase
DNase II
DNase II funksioneer teen 'n optimum pH van 4.5-5.0 en tweewaardige metaalione word benodig vir sy aktiwiteit, soortgelyk aan DNase I. Dit is bekend dat die meganisme van DNase II uit drie hoofstappe bestaan.
- Veelvuldige enkelstring-breuke word binne die DNA-ruggraat geïnduseer.
- Suuroplosbare nukleotiede en oligonukleotiede word geproduseer.
- Nie-lineêre hiperchromiese verskuiwing vind plaas in die laaste fase.
Die belangrikste inhibeerders van DNase-ensiem sluit in metaalcheleerders, oorgangsmetale en chemikalieë soos natriumdodesielsulfaat en β – merkapto-etanol.
Die hooftoepassings van DNase sluit in die voorbereiding van DNA-vrye RNA-ekstrakte en proteïenekstrakte, en die verwydering van sjabloon-DNA tydens in vitro transkripsie-eksperimente.
Wat is die ooreenkomste tussen Benzonase en DNase?
- Albei is hidrolitiese ensieme.
- Albei is nukleases.
- Albei neem deel deur die fosfodiesterbindings van nukleïensure te splits.
- Albei vereis 'n optimum pH en bergingstemperature om die aktiwiteit van die ensiem te handhaaf.
- Inhibeerders van ensieme sluit chelaatvormers, oorgangsmetale en skoonmaakmiddelchemikalieë in.
- Toepassings is hoofsaaklik gefokus op die verkryging van hoë suiwer ekstrakte van DNA, RNA en proteïene.
- Albei ensieme kan deur genetiese ingenieurswese geproduseer word.
Wat is die verskil tussen Bensonase en DNase?
Benzonase vs DNase |
|
| Benzonase is 'n ensiem wat in staat is om dubbelstring-DNS, lineêre DNA, sirkelvormige DNA en RNA te splits. | DNase is 'n ensiem wat in staat is om dubbelstring-DNS te splits. |
| Substraat vir die Ensiem | |
| Beide DNA en RNA is substrate vir bensonase. | DNA is die substraat vir DNase. |
| Struktuur | |
| Optimum pH-reeks van Bensonase is 7.0 -8.0 | Optimum pH-reekse van DNase I is 7.0 – 8.0 en DNase II is 4.5 – 5.0. |
Opsomming – Benzonase vs DNase
Nuklease-ensieme word wyd gebruik in verskillende eksperimentele prosedures met betrekking tot molekulêre biologie en genetiese ingenieurswese. Bensonase en DNase is twee tipes nukleases. Bensonase is betrokke by die afbreek van beide DNA en RNA, terwyl DNase betrokke is by die splitsing van dubbelstring DNA. Dit is die basiese verskil tussen bensonase en DNase. Tans word beide hierdie nuklease-tipes geproduseer deur rekombinante DNA-tegnologie wat 'n hoër kwaliteit ensieme lewer wat geoptimaliseer is vir maksimum produksie.
Laai PDF-weergawe van Benzonase vs DNase af
Jy kan die PDF-weergawe van hierdie artikel aflaai en dit vir vanlyn doeleindes gebruik soos per aanhalingsnota. Laai asseblief PDF-weergawe hier af Verskil tussen Benzonase en DNase
