Sleutelverskil – Papier vs Dunlaag vs Kolomchromatografie
Papierchromatografie, dunlaagchromatografie en kolomchromatografie is drie tipes chromatografiese tegnieke. Die sleutelverskil tussen papierchromatografie, dunlaagchromatografie en kolomchromatografie is gebaseer op die tipe stilstaande fase wat in die chromatografietegniek gebruik word. Papierchromatografie gebruik 'n sellulosepapier as sy stilstaande fase, Dunlaagchromatografie gebruik alumina of silikagel as sy stilstaande fase, terwyl Kolomchromatografie 'n kolom gebruik wat gepak is met 'n geskikte matriksmateriaal as sy stilstaande fase.
In die proses van skeiding en identifikasie van biomolekules soos proteïene en koolhidrate, is chromatografie 'n belangrike biofisiese tegniek wat gebruik word. Chromatografie skei verbindings op grond van hul oplosbaarheid, grootte en lading. Gebaseer op die skeidingsmeganisme, gebruik chromatografie meganismes soos ioonuitruiling, absorpsie, verdeling en grootte-uitsluiting en daar is drie chromatografiese tegnieke; naamlik papier-, dunlaag- en kolomchromatografie. Papierchromatografie is gebaseer op die vastestof-vloeistof-adsorpsie en oplosbaarheid van die verbinding, en dit gebruik 'n sellulosepapier as die stilstaande fase. Dunlaagchromatografie is gebaseer op vastestof-vloeistof-adsorpsie van molekules. Dit het 'n stilstaande fase wat tipies gemaak word van alumina of silikagel en die mobiele fase wat die oplosmiddel is. Kolomchromatografie gebruik 'n kolom gepak met 'n matriks wat gebruik word om molekules te skei hoofsaaklik op grond van hul grootte, affiniteit of sy lading.
Wat is papierchromatografie?
Papierchromatografie is die eenvoudigste tipe chromatografie wat gebruik word, en dit word nie vir uitgebreide navorsing gebruik nie. Dit word hoofsaaklik in studentelaboratoriums gebruik om biomolekules soos aminosure en koolhidrate wat in mengsels voorkom, te identifiseer. Papierchromatografie gebruik 'n stilstaande fase wat gemaak word met behulp van sellulosepapier of Whatman-filtreerpapier en 'n mobiele fase wat gewoonlik voorberei word met behulp van organiese oplosmiddels soos n-butanol, ens. Die stilstaande fase is versadig met water, wat die stilstaande fase vloeibaar maak. Dus, wanneer die verbindings raakgesien word en toegelaat word om te loop in die teenwoordigheid van die mobiele fase, afhangende van die oplosbaarheid van die verbindings, word hulle geskei. Dus, met die ontwikkeling van die chromatogram, kan kleuring gedoen word om die lengte van elke verbinding te bepaal. Die retensiefaktor kan daardeur bereken word.
Figuur 01: Papierchromatografie
Papierchromatografie kan verder geklassifiseer word as stygende papierchromatografie en dalende papierchromatografie afhangende van die rigting van die lopende oplosmiddel.
Wat is dunlaagchromatografie?
Dunlaagchromatografie of TLC is 'n algemeen gebruikte tegniek om verskillende aminosure teenwoordig in 'n mengsel te identifiseer of vir die identifikasie van proteïene. Die tegniek van skeiding is gebaseer op die vastestof-vloeistof adsorpsie. Tydens dunlaagchromatografie word 'n plaat gemaak van alumina of silikagel as die stilstaande fase gebruik. Die oplosmiddelmengsel verskil volgens die behoefte en kan verskillende kombinasies van organiese verbindings soos n-butanol, asynsuur en water gebruik om die oplosmiddel voor te berei. Die verbindings wat geskei moet word, word op die plaat gevlek en in die oplosmiddelmengsel gedompel. Sodra die oplosmiddel opwaarts beweeg op grond van die kapillêre werking wat deur die plaat gegee word, beweeg die verbindings wat op die plaat gevlek is ook na gelang van hul oplosbaarheid in die oplosmiddel.
Figuur 02: Dunlaagchromatografie
Die opsporing van die kolle na die chromatogram word uitgevoer deur verskillende kleurprosedures. Sommige gebruik ninhidrienkleuring wat redelik 'n giftige metode van kleuring is. Moderne dunlaagchromatogramme gebruik fluoressensietegnieke om die chromatogram na die lopie te sien. Afhangende van die afstande wat dit afgelê het, kan die retensietyd van elke verbinding bereken word. Dit kan gebruik word om die tipe verbinding wat geskei is, te identifiseer op grond van die mengsel wat gebruik word. TLC word hoofsaaklik gebruik om aminosure in 'n proteïenmengsel te identifiseer en ook om verskillende tipes monosakkariede wat in 'n mengsel teenwoordig is te skei.
Wat is kolomchromatografie?
Kolomchromatografie is 'n breë term wat gebruik word om baie tipes chromatografietegnieke te beskryf wat die kolomgebaseerde metode van skeiding gebruik. In kolomchromatografie word 'n fisiese kolom met 'n pakkingsmateriaal gebruik om die verbindings te skei. Die skeiding kan gebaseer wees op verskillende fisiese eienskappe wat deur die verbindings vertoon word. Hierdie eienskappe kan die lading, grootte, 3D-konformasie en bindingskapasiteit, ens wees. Dus, die kolom gepak met die matriksmateriaal dien as die stilstaande fase en die wasbuffer wat op die kolom toegepas word, dien as die mobiele fase.
As die molekules geskei word op grond van die grootte, word die verpakkingsmateriaal so verpak dat dit porieë laat vir die verbindings om deur te beweeg. Dus, die groter molekules wat nie deur die porieë kan vloei nie, word eerste geëlueer, terwyl die kleiner molekules baie langer neem om te elueer.
Figuur 03: Kolomchromatografie
As die molekules geskei word op grond van hul lading, sal die stilstaande fase óf 'n anioon- óf katioonuitruiler bevat waarheen die verbindings aangetrek sal word op grond van hul lading. Dus tydens die wasstap sal die nie-gebonde verbindings geëlueer word. Wanneer die elueringsbuffer bygevoeg word, sal die gebonde gelaaide verbindings geëlueer word. Die opsporing van hierdie eluente is meestal gebaseer op spektrofotometriese tegnieke.
Wat is die ooreenkomste tussen papierdunlaag- en kolomchromatografie?
- All Paper Dun Layer and Column Chromatography drie tegnieke word gebruik vir die skeiding van biomolekules soos aminosure, proteïene en koolhidrate.
- Papierdunlaag- en Kolomchromatografietegnieke het 'n mobiele fase en 'n stilstaande fase.
- Papier-dunlaag- en kolomchromatografietegnieke gebruik biofisiese meganismes vir skeiding.
Wat is die verskil tussen papierdunlaag- en kolomchromatografie?
Papier vs Dunlaag vs Kolomchromatografie |
|
| Papierchromatografie | Papierchromatografie is 'n chromatografiese tegniek wat gebruik word om verbindings te skei gebaseer op die vloeistof-vloeistof adsorpsie en oplosbaarheid van die verbinding. Dit gebruik 'n sellulosepapier as sy stilstaande fase. |
| Dunlaagchromatografie | Dunlaagchromatografie is nog 'n chromatografiese tegniek gebaseer op vastestof-vloeistof-adsorpsie van molekules. Dit het 'n stilstaande fase gemaak van alumina of silikagel en 'n oplosmiddel as die mobiele fase, wat die oplosmiddel is. |
| Kolomchromatografie | Kolomchromatografie gebruik 'n kolom gepak met 'n matriks wat gebruik word om molekules te skei hoofsaaklik op grond van hul grootte, affiniteit of sy lading. |
| Stasionêre fase | |
| Papierchromatografie | Papier gemaak van nitrosellulose van Whatman word as die stilstaande fase in papierchromatografie gebruik. |
| Dunlaagchromatografie | Alumina of Silikagel word as die stilstaande fase van die dunlaagchromatografie gebruik. |
| Kolomchromatografie | 'n Kolom gepak met geskikte verpakkingsmateriaal word as die stilstaande fase in die kolomchromatografie gebruik. |
| Mobiele fase | |
| Papierchromatografie | Lopende oplosmiddel is die mobiele fase van die papierchromatografie. |
| Dunlaagchromatografie | Lopende oplosmiddel is die mobiele fase van die dunlaagchromatografie. |
| Kolomchromatografie | Wasbuffer is die mobiele fase van die kolomchromatografie. |
| Meganismes wat vir skeiding gebruik word | |
| Papierchromatografie | Papierchromatografie is gebaseer op vastestof-vloeistof-absorpsie. |
| Dunlaagchromatografie | Dunlaagchromatografie is gebaseer op vastestof-vloeistof-absorpsie. |
| Kolomchromatografie | Kolomchromatografie is gebaseer op grootte-uitsluiting, lading en vorm. |
| Elusiebuffer | |
| Papierchromatografie | Nie deur papierchromatografie vereis nie. |
| Dunlaagchromatografie | Nie nodig vir dunlaagchromatografie nie. |
| Kolomchromatografie | Vereis in kolomchromatografie. |
| Opsporing | |
| Papierchromatografie | Verkleuring en deur die retensiefaktor te bepaal. |
| Dunlaagchromatografie | Verkleuring en deur die retensiefaktor te bepaal. |
| Kolomchromatografie | Spektrofotometriese bepaling. |
Opsomming – Papierdunlaag vs Kolomchromatografie
Papierchromatografie, TLC en kolomchromatografie is skeidingstegnieke wat gebruik word om biomolekules soos proteïene, aminosure en koolhidrate (hoofsaaklik monosakkariede) te skei. Papierchromatografie gebruik 'n sellulosepapier as die stilstaande fase, en die meganisme van skeiding is gebaseer op vastestof-vloeistof-adsorpsie. TLC gebruik ook vastestof-vloeistof adsorpsie meganismes. Die molekules word op die stilstaande fase geskei, afhangende van hul oplosbaarheid in die mobiele fase. Kolomchromatografie gebruik fisiese eienskappe soos grootte, vorm, lading en die molekulêre gewig van die verbinding om te skei. Die kolom gepak met die matriksmateriaal dien as die stilstaande fase, terwyl die wasbuffer as die oplosmiddelfase optree. Dit is die verskil tussen 'n papierdun laag en kolomchromatografie.
