Sleutelverskil – Warm vs Koue Trypsinisering
Warm en koue tripsinisering is twee metodes wat gebruik word in ensiematiese disaggregasie van selle in diersel kweek. Die belangrikste verskil tussen warm en koue tripsinisering, soos die name aandui, hang af van die temperatuur waarteen die tripsien bygevoeg word vir sellulêre disaggregasie. Warm tripsinisering vind plaas onder hoër temperatuur toestande (36.5 – 37 0C) terwyl koue tripsinisering onder lae-temperatuur toestande plaasvind.
Tydens die proses van primêre sel verbouing van dierselle, is daar drie hoofmetodes wat gebruik word en het bewys dat dit suksesvol was. Die drie metodes sluit in meganiese disaggregasie van selle, ensiematiese disaggregasie van selle en die primêre uitplantingstegniek. Die ensiematiese disaggregasie van selle wat lei tot die isolasie van selle en dit word gedoen deur die proteïenafbrekende ensiem tripsien. Daarom staan hierdie proses bekend as tripsinisering. Tripsinisering kan onder twee verskillende toestande gedoen word, naamlik warm tripsinisering en koue tripsinisering. Warm tripsienisering is die metode om die selle met tripsien onder warm toestande teen 'n temperatuur van 36.5 – 37 0C te behandel. Koue tripsinisering is die proses van tripsienbehandeling wat onder kouer toestande plaasvind, verkieslik in ys wat baie lae temperature handhaaf.
Wat is Warm Trypsinization?
Trypsinisasie kan gedoen word om die sellulêre komponente te disaggregeer om die selle te isoleer om 'n primêre selkultuur te produseer. Tripsien is 'n proteïenafbraak-ensiem, en die ensiemmengsel wat in tripsinisering gebruik word, kan óf 'n ru-ekstrak óf 'n gesuiwerde produk wees. Daar word gesê dat die ru-ekstrak meer doeltreffend is in proteïenlise en sel-disintegrasie, aangesien dit ander afbrekende ensieme bevat.
Warm tripsinisering is die mees gebruikte ensiematiese metode vir sel-disaggregasie wat onder hoër temperatuurtoestande plaasvind. Voor die behandeling deur tripsinisering, word die verlangde weefsel in kleiner stukkies gekap. Dit vergemaklik die maklike disaggregasieproses. Die gekapte weefsel word dan gewas in 'n spesiale medium bekend as die Dissection Basal S alt medium.
Na die voltooiing van die wasstap, word die selle omskep in 'n fles wat die aktiewe ensiem bevat, wat tripsien is. Aangesien hierdie tegniek 'n warm tripsiniseringsprotokol impliseer, word die tripsien by 'n temperatuur van ongeveer 37 0C vir ongeveer vier uur geplaas.
Figuur 01: Trypsien
Die inhoud word gemeng en geroer deur middel van sentrifugeermetodes vir die gemak van die protokol en om die disaggregasieproses te bespoedig. Sodra die aanbevole tyd bereik is, kan die selle van die supernatant afgelei word. Die selle afkomstig van die supernatant word dan by 'n spesifieke temperatuur en tyd geïnkubeer.
Wat is koue tripsinisering?
Koue tripsinisering is die ander tipe tripsinisering wat onder koue toestande plaasvind. In hierdie tegniek word die selle wat gekap en gewas word in flessies op ys geplaas en dan met tripsien geweek. Die tydperk van week is baie langer – ongeveer 6 – 24 uur.
Na voltooiing van die weekprosedure, word die tripsien uit die sellysaat verwyder, en die weefselstukke word verder by 37 0C vir ongeveer 20 – 30 minute geïnkubeer. Die disaggregasie van die selle word bewerkstellig deur herhaalde pipettering van die weefselmengsel. Dit sal die selle toelaat om van die membraan te dissosieer en na die supernatant te kom. Sodra die selle in die supernatant is, word hulle geïnkubeer en teen 'n verlangde temperatuur en tydperk gekweek.
Die koue tripsiniseringsmetode het verskeie voordele
- Hoër opbrengs van lewensvatbare selle aangesien die selskade tot die minimum beperk word. Die selskade word tot die minimum beperk deur nie sentrifugeringstappe te gebruik nie.
- Hoogs gerieflike metode.
- Minder moeisaam.
Die hoofbeperking van die koue tripsiniseringsmetode is dat groot hoeveelhede nie in een geval gebruik kan word nie.
Wat is die ooreenkomste tussen warm en koue tripsinisering?
- Beide Warm en Koue Tripsieniseringsprosesse gebruik die ensiem tripsien vir disaggregasie van selle.
- Beide warm en koue tripsiniseringsprosesse word gebruik in selkultuurprosedures vir die disaggregasie van selle.
- In beide warm en koue tripsinisering behandelingsprosedures, is die selle afgelei van die supernatant.
Wat is die verskil tussen warm en koue tripsinisering?
Warm vs. Koue Trypsinisering |
|
| Warm tripsienisering is die metode om die selle met tripsien onder warm toestande teen 'n temperatuur van 36,5 – 37 te behandel 0. | Koue tripsienisering is die proses van tripsienbehandeling wat onder kouer toestande plaasvind, verkieslik in ys wat baie lae temperature handhaaf. |
| Protokol | |
| Die gekapte weefselstukke word deurlopend deur die prosedure op 37 0C gehou. | Die gekapte sneesdoekies word aanvanklik by yskoue temperature gehou en dan by 37 0. |
| Temperature | |
| Warm tripsinisering vind plaas by 36.5 – 37 0 | Koue tripsinisering vind plaas by yskoue temperature. |
| Tydverbruik | |
| Kinder tyd benodig vir die hele proses (ongeveer 4 uur) van warm tripsinisering. | Langer tyd benodig (ongeveer 6 – 24 uur) vir koue tripsinisering. |
| Opbrengs van lewensvatbare selle | |
| Laag in warm tripsinisering. | Hoog in koue tripsinisering. |
| Gebruik van sentrifugering | |
| Sentrifugering word vereis vir disaggregasie van selle in warm tripsinisering. | Sentrifugering word nie in koue tripsinisering vereis nie. |
| Aanvanklike weefselhoeveelheid vir tripsinisering | |
| 'n Groter hoeveelheid weefsel kan in warm tripsinisering gebruik word. | 'n Kleiner hoeveelheid weefsel kan in koue tripsinisering gebruik word. |
| Selskade | |
| Hoog as gevolg van sentrifugering in warm tripsinisering. | Minder as gevolg van koue tripsinisering. |
Opsomming – Warm vs Koue Trypsinisering
Tripsinisering is die metode om die proteïenafbrekende ensiem tripsien te gebruik vir die disaggregasie en voorbereiding van primêre selkulture tydens selkweekproses. Daar is twee hooftegnieke van tripsinisering gebaseer op die temperature wat tydens die prosedure gebruik word. Hulle is warm en koue tripsinization. Warm tripsinisering word uitgevoer teen 37 0C, terwyl koue tripsinisering onder yskoue toestande uitgevoer word. Alhoewel koue tripsinisering langer neem om te voltooi, word gesê dat dit 'n hoër opbrengs van lewensvatbare selle het. Dit is te wyte aan die feit dat selskade geminimaliseer word in koue tripsinisering aangesien dit nie kragtige sentrifugeringstappe gebruik nie. Dit is die verskil tussen warm en koue tripsinisering.
