Sleutelverskil – Stapelgel vs skeigel
Die terme stapelgel en skeigel word gebruik om die SDS-PAGE-tegniek te verduidelik. SDS-PAGE of natriumdodesielsulfaat-poliakrielamiedgelelektroforese is 'n laboratoriumtegniek wat gebruik word om proteïenmolekules te skei op grond van hul molekulêre gewigte. Die teorie agter die tegniek is dat proteïene met verskillende molekulêre gewigte verskillende migrasietempo's toon; lae molekulêre gewig molekules migreer vinniger terwyl hoë molekulêre gewig molekules stadig migreer. Die medium vir migrasie is 'n jel. Daar is twee soorte gels wat as stapelgel en skeigel genoem word. Die belangrikste verskil tussen stapelgel en skeigel is dat die pH van die stapelgel 6.8 is, terwyl die pH van die skeigel 8.8 is.
Wat is Stacking Gel?
Stacking gel is 'n lae gekonsentreerde poliakrielamied gel wat bo-op meer gekonsentreerde oplosgel (skeigel) geplaas word in SDS-PAGE tegniek. Die stapelgel word gebruik om die resolusie van elektroforese te verbeter. Die resolusie neem toe as gevolg van die verskil tussen konsentrasies van stapelgel en oplosgel wat op die proteïene in die monster uitwerk. Aangesien die konsentrasie van poliakrielamied in stapelgel laag is, is die poriegrootte hoër. Dit help ook om die skeiding te verhoog.
Die stapelgel is 'n los poliakrielamiedgel met groot porieë van ongeveer 7% poliakrielamied. Hierdie porieë dien nie as 'n aansienlike versperring vir groot proteïenmolekules nie. Daarom beïnvloed hierdie gel effens op die mobiliteit van daardie proteïene. Dit maak skeiding volgens die mobiliteit en grootte van proteïen deur hulle tussen twee gels te konsentreer.
Figuur 01: SDS-PAGE Acrylamide Gel
Die pH van die stapelgel is 6,8. Die pH is suur as die van die oplos van gel met 2 pH-eenhede. Hierdie pH impliseer 'n laer ioniese sterkte dus 'n hoër elektriese weerstand. Dit veroorsaak die beweeglikheid van proteïene as ander gelaaide deeltjies wat in die jel voorkom.
Wat is Separating Gel?
Skeigel of oplosgel van 'n SDS-PAGEtegniek is 'n hoogs gekonsentreerde poliakrielamiedgel wat bo-op lae gekonsentreerde stapelgel geplaas word. Die skeigel bevat 'n hoë hoeveelheid poliakrielamied (10%). Die pH van hierdie gel word gehandhaaf as pH=8.8, wat 'n hoër pH-vlak is as dié van die stapelgel.
Figuur 02: 'n Gel-elektroforese-apparaat
Wanneer die proteïenmolekules die skeidingsgel bereik, word die migrasie van daardie molekules vertraag omdat die skeidingsgel 'n hoëkonsentrasiegel is met 'n klein poriegrootte wat as 'n aansienlike versperring vir die beweging van die proteïenmolekules kan dien. Hierdie verlangsaming laat die ander proteïene stadig migreer om in te haal, wat lei tot 'n smal, gekonsentreerde band tussen die twee gels.
Wat is die verwantskap tussen stapelgel en skeigel?
Beide Stapelgel- en Skeigel-tipes word in dieselfde apparaat gebruik
Wat is die verskil tussen stapelgel en skeigel?
Stapelgel vs Skeigel |
|
| Stacking-gel is 'n lae-gekonsentreerde poliakrielamied-gel wat bo-op meer gekonsentreerde oplosgel (skeigel) in SDS-PAGE-tegniek geplaas word. | Skeigel of oplosgel van 'n SDS-PAGE-tegniek is 'n hoogs gekonsentreerde poliakrielamiedgel wat bo-op 'n lae gekonsentreerde stapelgel geplaas word. |
| Plasing | |
| Stapelgel word op die oplossende (skei)gel geplaas. | Skeigel word op die bodem van die houer wat vir gelelektroforese gebruik word geplaas. |
| Konsentrasie | |
| Die konsentrasie van stapelgel is hoog. | Die konsentrasie van skeigel is laag. |
| Poliakrielamied-inhoud | |
| Stapeljel bevat ongeveer 7% poliakrielamied. | Skeigel bevat ongeveer 10% poliakrielamied. |
| pH | |
| Die pH van die stapelgel is 6,8. | Die pH van die skeigel is 8,8. |
| Poriegrootte | |
| Groot poriegroottes is teenwoordig in stapelgel. | Klein poriegroottes is teenwoordig in skeigel. |
| Resolusie | |
| Stapelgel gee beter resolusie. | Skeigel gee 'n swak resolusie. |
Opsomming – Stapelgel vs skeigel
Stapelgel en skeigel is twee tipes poliakrielamiedgels wat gebruik word om beter skeiding van proteïenmolekules in 'n gegewe monster te kry. Die verskil tussen stapelgel en skeigel is dat die pH van die stapelgel 6.8 is, terwyl die pH van die skeigel 8.8 is.
