Sleutelverskil – Chromosoomstap vs spring
Chromosoomloop en chromosoomspring is twee tegniese instrumente wat in molekulêre biologie gebruik word om gene op die chromosome op te spoor en fisiese kartering van die genome. Chromosoomloop is 'n tegniek wat gebruik word om 'n teikengeen in 'n genomiese biblioteek te kloneer deur herhaalde isolasie en kloning van aangrensende klone van die genomiese biblioteek. Chromosomale spring is 'n spesiale weergawe van chromosomale loop wat die breekpunte van chromosomale loop oorkom. Chromosomale loop kan slegs klein lengtes chromosome volgorde en karteer, terwyl chromosomale spronge volgordebepaling van groot dele van chromosome moontlik maak. Dit is die sleutelverskil tussen chromosomale loop en chromosomale spring.
Wat is chromosoomloop?
Chromosoomloop is 'n instrument wat die onbekende volgordestreke van chromosome verken deur oorvleuelende beperkingsfragmente te gebruik. In chromosoomloop word 'n deel van 'n bekende geen as 'n sonde gebruik en voortgegaan met die karakterisering van die volle lengte van die chromosoom wat gekarteer of georden moet word. Dit gaan van die merker na die teikenlengte. By chromosoomloop word die punte van elke oorvleuelende fragmente gebruik vir hibridisering om die volgende volgorde te identifiseer.
Die probes word voorberei uit die eindstukke van gekloonde DNA en hulle word gesubkloon. Dan word hulle gebruik om die volgende oorvleuelende fragment te vind. Al hierdie oorvleuelende rye word gebruik om die genetiese kaart van die chromosoom te konstrueer en die teikengene op te spoor. Dit is 'n metode om lang stukke DNA te ontleed deur klein oorvleuelende fragmente uit die hersaamgestelde genomiese biblioteek.
Chromosoom Stap-tegniek – Stappe
-
Isolasie van 'n DNS-fragment wat die bekende geen of merker naby teikengeen bevat
- Voorbereiding van die beperkingskaart van die geselekteerde fragment en subkloning van die eindgebied van die fragment om as 'n sonde te gebruik
- Hybridisering van die sonde met die volgende oorvleuelende fragment
- Voorbereiding van die beperkingskaart van die fragment 1 en subkloning van die eindgebied van die fragment 1 om as 'n sonde te gebruik vir die identifikasie van die volgende oorvleuelende fragment.
- Hybridisering van die sonde met die volgende oorvleuelende fragment 2
- Voorbereiding van die beperkingskaart van fragment 2 en subkloning van die eindgebied van fragment 2 om te dien as 'n sonde vir die identifikasie van die volgende oorvleuelende fragment
Bogenoemde stappe moet voortgesit word tot by die teikengeen of tot 3' einde van die totale lengte van die ry.
Figuur 01: Chromosoomlooptegniek
Chromosoomloop is 'n belangrike aspek van sitogenetiese in die vind van SNP's van baie organismes en die ontleding van die geneties oordraagbare siektes en die vind van mutasies van relevante gene.
Wat is chromosoomspring?
Chromosomale spring is 'n tegniek wat in molekulêre biologie gebruik word vir fisiese kartering van genome van die organismes. Hierdie tegniek is ingestel om 'n versperring van die chromosomale loop wat ontstaan het by die vind van die herhalende DNA-streke tydens die kloningsproses te oorkom. Daarom kan chromosoomspringtegniek beskou word as 'n spesiale weergawe van chromosomale loop. Dit is 'n vinnige metode in vergelyking met chromosomale loop en maak dit moontlik om die herhalende DNA-volgordes te omseil wat nie geneig is om gekloon te word tydens chromosomale loop nie. Chromosomale sprong verklein die gaping tussen die teikengeen en die beskikbare bekende merkers vir genoomkartering.
Chromosoomspring-instrument begin met die sny van 'n spesifieke DNA met spesiale beperking-endonukleases en afbinding van die fragmente in sirkelvormige lusse. Dan word 'n onderlaag wat uit 'n bekende volgorde ontwerp is gebruik om die sirkelvormige lusse te volgorde. Hierdie onderlaag maak op 'n alternatiewe manier spring en volgordebepaling moontlik. Gevolglik kan dit die herhalende DNS-volgordes omseil en vinnig deur die chromosoom loop vir die soektog na die teikengeen.
Die ontdekking van die geen kodeer vir sistiese fibrose-siekte is gedoen met behulp van die chromosomale spring-instrument. Gekombineer, kan chromosomale spring en stap die genoomkarteringproses verbeter.
Figuur 02: Chromosoomspring
Wat is die verskil tussen chromosoomstap en spring?
Chromosome Walking vs Jumping |
|
| Chromosoom is 'n instrument wat in molekulêre biologie gebruik word vir genoomkartering en die opspoor van spesifieke gene. | Chromosoomspring is 'n hulpmiddel wat gebruik word vir fisiese kartering van genome en vinnige vind van teikengene in die chromosome. |
| Vergelykende lengtes van volgorde | |
| Slegs klein fragmente kan gekloon word deur chromosomale loop. | Groter lengtes van die chromosome kan gekarteer word deur die chromosomale sprong. |
| Kloning van herhalende DNA in chromosome | |
| Chromosoomlooptegniek sukkel om deur die herhalende DNS-volgordes wat in chromosome voorkom, te loop. | Dit maak dit moontlik om die herhalende DNA-volgordes te omseil. Daarom is daar geen probleme wanneer jy hulle tydens die opeenvolging vind nie. |
| Faktore wat die prosesse beïnvloed | |
| Die sukses van die proses hang af van die grootte van die genoom en die afstand wat vanaf 'n bekende genomiese posisie na die verlangde geen “gestap” moet word. | Die sukses hang nie af van die grootte van die genoom van die afstand van merker tot teiken nie. |
| effekte van ongekloonde DNA | |
| Chromosomale loop kan gestop word deur ongekloonde DNS-fragmente. | Die laagste noot wat piccolo's kan speel, is D4. |
| Behoefte aan 'n bekende reeks | |
| Die proses begin met 'n bekende geen naby die teiken. | Die proses vereis 'n bekende fragment vir onderlaagontwerp. |
Opsomming – Chromosoomstap vs spring
Chromosomale loop word gereeld toegepas wanneer dit bekend is dat 'n spesifieke geen naby 'n voorheen gekloonde geen in 'n chromosoom geleë is en dit moontlik is om dit te identifiseer met herhaalde isolasie van aangrensende genomiese klone uit die genomiese biblioteek. Wanneer herhalende DNA-streke egter tydens die chromosomale looptegniek gevind word, kan die proses nie voortgesit word nie. Daarom breek die tegniek van daardie punt af. Chromosomale spring is 'n molekulêre biologiese hulpmiddel wat hierdie beperking vir die kartering van genome oorkom. Dit omseil hierdie herhalende DNA-streke wat moeilik is om te kloon en help met fisiese kartering van genome. Dit is die hoofverskil tussen chromosoomloop en spring.
