Sleutelverskil – Phusion vs Taq Polimerase
DNA-polimerases word wyd gebruik ensieme in molekulêre biologie tegnieke en is ook natuurlik teenwoordig in alle organismes wat DNA-replikasie ondergaan. Hulle is die sleutel polimeriserende ensieme wat tydens replikasie betrokke is. DNA-polimerase is in staat om nukleotiede by die vrye 3'-kant van die DNA-string te voeg en sodoende die verlenging van 'n nuwe string te veroorsaak. Op die oomblik, as gevolg van die ontwikkeling van molekulêre biologie in siektediagnostiek en industriële toepassings, is dit belangrik om polimerases met verskeie voordelige eienskappe te vervaardig. Dit verhoog die akkuraatheid van die metode en maak dit 'n vinniger tegniek. Phusion en Taq-polimerase is twee kommersieel vervaardigde termostabiele polimerase-ensieme wat in spesiale molekulêre toepassings gebruik word. Phusion is 'n DNA-polimerase wat van Pyrococcus furiosus geïsoleer is en word hoofsaaklik in kloningseksperimente gebruik om die getrouheid te verhoog. Taq DNA Polimerase is die standaard DNA polimerase wat in die Polimerase Kettingreaksie (PCR) gebruik word, en dit is geïsoleer van die termostabiele bakterie; Thermus aquaticus. Die belangrikste verskil tussen die twee ensieme is die bronmikro-organisme. Phusion is geïsoleer van die ekstremofiel, Pyrococcus furiosus, terwyl Taq-polimerase van die termofiel, Thermus aquaticus, geïsoleer is.
Wat is Phusion?
Phusion DNA-polimerase is 'n nuwe polimerase wat vervaardig word deur die ensiem te isoleer van Pyrococcus furiosus, wat 'n ekstremofiele Archaea is. Hierdie mikrobes woon in uiters hoë-temperatuur toestande, waardeur die polimerase 'n hoogs hitte-stabiele polimerase maak. Phusion-polimerase word gebruik om uiterste getrouheid oor die konvensionele termostabiele polimerase te verkry; Taq polimerase. Phusion-polimerase is in staat om lang sjablone tot 7.5kb se genomiese DNA te versterk. Die optimale polimerisasiekapasiteit van Phusion-polimerase is by 720 C. Phusion word ook gebruik in kloningsprodukte vir volgordebepaling, uitdrukkingsanalise en mutasie-analise.
Phusion DNA-polimerase het die 3' – 5' eksonuklease-aktiwiteit. Dit laat proeflees van die nuut gesintetiseerde string na die sintese toe. Gevolglik kan die nukleotied-wanpassings maklik herstel word. Dit het dus 'n laer foutkoers. Algehele voordele van Phusion-polimerase is;
- Extreme Fidelity
- Hoëspoed en verminderde verlengingstyd
- robuuste reaksies en vereis minimale optimalisering
- Hoë opbrengs
Figuur 01: Phusion
Die grootste nadeel van Phusion-polimerase is dat dit geïnhibeer word in die teenwoordigheid van deoksiuridientrifosfaat (dUTP). Wanneer dUTP's in die reaksiemengsel opgehoop word, kan dit die aksies van Phusion-polimerase inhibeer. Dit word voorkom deur die reaksiemengsel met dUTPase te behandel voordat die ensiem bygevoeg word. Tans word 'n dUTP-weerstandige variant van Phusion-polimerase bekend as Pfu Turbo gebruik in plaas van Phusion-polimerase as 'n oplossing vir hierdie probleem.
Wat is Taq Polimerase?
Taq DNA-polimerase-uitvindsel het 'n rewolusie in die veld van molekulêre biologie verander. Dit het 'n groot probleem in DNA-amplifikasie opgelos. Taq DNA-polimerase is 'n hitte-stabiele polimerase-ensiem wat uit die termofiele bakterie, Thermus aquaticus, onttrek en geïsoleer is. Die ontdekking van hierdie ensieme lei tot die ontwikkeling van die PCR. Hierdie ensiem het die gebruik van polimerase-kettingreaksie in DNA-amplifikasie moontlik gemaak in plaas van konvensionele moeisame kloningstegnieke. PCR word nou gebruik in molekulêre diagnostiek, landbou en industriële velde met baie nuwe variasies bygevoeg tot die tegniek.
Figuur 02: Taq Polymerase
Taq DNA-polimerase funksioneer teen die optimale temperatuurreeks tussen 720C – 800C. Taq DNA-polimerase vereis 'n ko-faktor; magnesium vir sy funksie. Taq-polimerase het nie die 3' – 5'-proefleesvermoë nie, daarom is die foutkoers van Taq DNA-polimerase hoog in vergelyking met meer nuwer tipes DNA-polimerases soos Phusion-polimerase ens. Maar die gewildheid van Taq DNA-polimerase bly die dieselfde regoor die wêreld van wetenskap as gevolg van die gerief en die buigsaamheid van die ensiem.
Wat is die ooreenkomste tussen Phusion en Taq-polimerase?
- Beide Phusion- en Taq-polimerase-ensieme is polimeriserende ensieme wat in staat is om nukleotiede by die 3'-vrye einde van die DNA-string te voeg.
- Beide Phusion- en Taq-polimerases vereis 'n primer-volgorde om polimerisasie te inisieer.
- Beide Phusion- en Taq-polimerases is hittebestendig.
- Beide Phusion- en Taq-polimerases word in PCR-meganismes gebruik om DNA te amplifiseer.
- Wanneer die polimerase by die reaksiemengsel gevoeg word, word beide Phusion- en Taq-polimerases laaste bygevoeg om die doeltreffendheid van die ensiem te verseker.
- Beide Phusion- en Taq-polimerases word kommersieel gesintetiseer vir molekulêre biologie eksperimentele doeleindes.
- Beide Phusion- en Taq-polimerases vereis 'n kofaktor om sy funksie te voltooi.
Wat is die verskil tussen Phusion en Taq Polimerase?
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Phusion is 'n DNA-polimerase wat van Pyrococcus furiosus geïsoleer is en word hoofsaaklik in kloningseksperimente gebruik om die getrouheid te verhoog. | Taq DNA Polimerase is die standaard DNA-polimerase wat in die Polimerase Kettingreaksie (PCR) gebruik word, en dit is geïsoleer van die termostabiele bakterie, Thermus aquaticus. |
| Bron Organism | |
| Phusion word uit ekstremofiele archaea onttrek – Pyrococcus furiosus. | Hierdie literêre werke strek vanaf die kolonisasietydperk tot die dekolonisasietydperk. |
| proefleesvermoë | |
| 3’ – 5’-proefleesvermoë is teenwoordig in Phusion. | 3’ – 5’-proefleesvermoë is afwesig in Taq-polimerase. |
| Fidelity | |
| Hooggetrouheid is daar met Phusion. | Taq-polimerase toon lae getrouheid. |
| Amplification | |
| Phusion is in staat om lang DNS-fragmente te versterk. | Taq-polimerase is in staat om baie korter DNA-fragmente te versterk. |
| dUTP-vergiftiging | |
| Phusion-aksie word belemmer deur die akkumulasie vreemd. | Taq-polimerase word nie deur dUPT geïnhibeer nie. |
Opsomming – Phusion vs Taq-polimerase
Phusion en Taq DNA-polimerase is twee hitte-stabiele polimerases wat in PCR-tegnieke gebruik word. Phusion is 'n polimerase geïsoleer van die ekstremofiel, Pyrococcus furiosus, terwyl Taq geïsoleer is van die termostabiele bakterieë Thermus aquaticus. Taq DNA-polimerase-ontdekking lei tot die PCR-uitvinding. Phusion het baie voordele bo Taq wat Phusion 'n beter opsie gemaak het om hoëtrou-DNS te produseer. Taq-polimerase word egter steeds as die standaard-polimerase-ensiem in PCR gebruik. Dit is die verskil tussen Phusion- en Taq-polimerase.
