Die sleutelverskil tussen Klenow en T4 DNA-polimerase is dat Klenow-fragment 'n groot fragment van E. coli DNA-polimerase 1 is, terwyl T4 DNA-polimerase DNA-polimerase 1 van bakteriofaag T4 is.
DNA-polimerases is ensieme wat die vorming van DNA kataliseer deur deoksiribonukleotiede by die 3'-OH einde van 'n voorafbestaande primer te voeg. Daar is verskillende tipes DNA-polimerases. Die meeste DNA-polimerases wat in molekulêre biologie gebruik word, is prokariotiese DNA-polimerases. Klenow-fragment en T4 DNA-polimerase is twee tipes DNA-polimerases wat 'n prokariotiese oorsprong het. Klenow-fragment is die groot fragment wat gegenereer word uit die splitsing van E.coli DNA polimerase 1 in twee fragmente deur bakteriële protease subtilisin. T4 DNA-polimerase is die DNA-polimerase 1 van bakteriofaag T4. Beide Klenow en T4 DNA polimerase het 5′→3′ polimerase en 3′→5′ eksonuklease aktiwiteit. Hulle het albei nie 5′→3′ eksonuklease-aktiwiteit, wat hulle meer geskik maak vir baie toepassings in molekulêre biologie.
Wat is Klenow?
Klenow-fragment is 'n DNA-polimerase wat nuttig is in molekulêre biologie. Wanneer E. coli DNA-polimerase 1 proteolitiese vertering deur bakteriële protease, subtilisien, ondergaan, lei dit tot twee fragmente: een is 'n groot fragment, en die ander een is 'n klein fragment. Klenow-fragment is die groot fragment wat 68 kDa groot is. Klenow-fragment het 5'→3'-polimerase- en 3'→5'-eksonuklease (proeflees) aktiwiteite van DNA Pol I. Die 3'→5'-eksonuklease-aktiwiteit van die Klenow-fragment fasiliteer die verwydering van verkeerde basisse wat polimerisasie vorder. Klenow-fragment bevat nie 5′→3′-eksonuklease-aktiwiteit nie, wat getoon word deur vollengte of ongeskonde E.coli DNA-polimerase 1. Dit is voordelig wanneer slegs die polimerisasie-aktiwiteit alleen nodig is. Klenow-fragmente word gebruik om 5'-oorhange te vul, sintese van probes, volgordebepaling van DNA, sintese van dubbelstring DNA, sintese van cDNA tweede string en plekgerigte mutagenese.
Figuur 01: Klenow Fragment
In sekere toepassings word die 3′→5′ eksonuklease-aktiwiteit van die Klenow-fragment ook ongewens. Dit kan verwyder word deur 'n mutasie in te bring aan die geen wat kodeer vir Klenow-fragment. Die resulterende Klenow-fragment staan bekend as ekso-Klenow-fragment. Daarom het ekso-Klenow-fragment slegs die 5′→3′-polimerase-aktiwiteit van E. coli-polimerase 1.
Wat is T4 DNA-polimerase?
T4 DNA-polimerase is 'n DNA-polimerase wat die sintese van DNA kataliseer. Dit is 'n proteïen gekodeer deur Bakteriofaag T4. Struktureel is T4 DNA-polimerase 'n proteïen van 898 aminosuurresidu (molekulêre gewig van 103,6 kDa). Dit vereis 'n sjabloon en 'n onderlaag om die sintese te kataliseer.
Figuur 02: T4 DNA-polimerase
Soortgelyk aan die Klenow-fragment, het T4 DNA-polimerase beide 5′→3′-polimerase- en 3′→5′-eksonuklease-aktiwiteite. Boonop het dit nie 5′→3′ eksonuklease-aktiwiteit ook nie. T4 DNA-polimerase is nuttig in die vul van 5'-uitsteekende punte van DNA-fragmente. Dit word ook dikwels gebruik vir 5'-end- of 3'-end-etikettering van dubbelstring-DNS. T4 DNA polimerase word gereeld gebruik in stomp kloning. Die 3′→5′ eksonuklease (proeflees) aktiwiteit van T4 DNA polimerase is sterker (meer as 200 keer) as die Klenow fragment. Die belangrikste is dat T4 DNA-polimerase 'n hoë prosessiwiteit het (400 nukleotiede per sekonde).
Wat is die ooreenkomste tussen Klenow en T4 DNA-polimerase?
- Klenow en T4 DNA-polimerase is twee prokariotiese polimerases.
- Albei polimerases het 5′→3′-polimerase- en 3′→5′-eksonuklease-aktiwiteit.
- Hulle vertoon nie 5′→3′-eksonuklease-aktiwiteit nie.
- Albei ensieme benodig 'n sjabloon en 'n onderlaag om die sintese van DNA te kataliseer.
- Hierdie ensieme kan hitte-geïnaktiveer word teen 75 0
Wat is die verskil tussen Klenow en T4 DNA-polimerase?
Die sleutelverskil tussen Klenow en T4 DNA-polimerase is die oorsprong van elke ensiem. Klenow-fragment is afkomstig van 'n bakterie terwyl T4 DNA-polimerase afkomstig is van 'n bakteriofaag wat 'n virus is. T4 DNA-polimerase het 'n hoë prosessiwiteit as Klenow-fragment. Boonop het T4 DNA-polimerase 'n sterk proefleesaktiwiteit as die Klenow-fragment. Dit is dus nog 'n verskil tussen Klenow en T4 DNA-polimerase.
Die onderstaande inligtingsgrafika lys meer verskille tussen Klenow en T4 DNA-polimerase in tabelvorm.
Opsomming – Klenow vs T4 DNA-polimerase
Klenow-fragment is 'n groot fragment van E. coli DNA-polimerase 1. Dit het slegs 5′→3′-polimerase- en 3′→5′-eksonuklease-aktiwiteite. Dit het nie 5′→3′ eksonuklease aktiwiteit van ongeskonde E. coli DNA pol 1. Daarom is Klenow fragment 'n bakteriële polimerase. Aan die ander kant is T4 DNA-polimerase 'n polimerase wat deur die bakteriofaag T4 gekodeer word. Soortgelyk aan die Klenow-fragment, bevat dit beide 5'→3'-polimerase- en 3'→5'-eksonuklease-aktiwiteite, en dit het nie 5'→3'-eksonuklease-aktiwiteit nie. T4 DNA-polimerase het egter hoë prosessiwiteit en hoë proefleesaktiwiteit as die Klenow-fragment. So, dit is die sleutelverskil tussen Klenow en T4 DNA-polimerase.
