Sleutelverskil – DNA vs RNA-ekstraksie
Die studie van DNA en RNA is noodsaaklike aspekte om die basiese konsepte van molekulêre biologie, biotegnologie en genetika te verstaan. Onttrekking van suiwer DNA- en RNA-monsters is nodig om eksperimentele prosedures tydens hierdie studies uit te voer. Die belangrikste verskil tussen DNA- en RNA-ekstraksie is dat DNA-ekstraksieproses DNA suiwer terwyl RNA-ekstraksie RNA suiwer. DNA-ekstraksieproses het drie verskillende stappe: sellise en katabolisme van membraanlipiede en proteïene, klontering van kataboliete deur gekonsentreerde soutoplossing en die presipitasie van DNA met etanol. Die driestapprosedure kan uit twee opsionele stappe bestaan. RNA-suiweringsproses bestaan uit vier verskillende stappe: byvoeging van guanidiumtiosianaat vir sellise, proteïendenaturering insluitend ribonukleases, skeiding van RNA deur die byvoeging van chloroform en fenol en die was van die neerslag met etanol.
Wat is DNA-ekstraksie?
DNA-ekstraksie is 'n fisiese en chemiese proses wat gebruik word om DNS uit 'n monster te suiwer. DNS-ekstraksie is 'n belangrike aspek in die konteks van molekulêre biologie en forensiese wetenskappe. Die proses bestaan uit drie basiese stappe. Aanvanklik moet die selle van belang verkry word. Vervolgens word sellise vergemaklik om die selmembraan te breek, wat die sel oopmaak en die sitoplasma saam met DNA blootstel. Oppervlakaktiewe middels of ander skoonmaakmiddels kan gebruik word om die lipiede vanaf die selmembraan te lyseer terwyl die teenwoordige proteïene deur proteases gekataboliseer word. Dit is 'n opsionele stap. Sodra die sel gelys is, word klontering van die gekataboliseerde molekules vergemaklik deur gekonsentreerde soutoplossings. Dit word gevolg deur sentrifugering van die oplossing wat die puinklonte van DNA skei. In hierdie stadium word die gedifferensieerde DNA gemeng met die reagense en soute wat tydens die selsiklus gebruik word.
Figuur 01: DNA-ekstraksie
Om dit verder te suiwer, kan die volgende stappe gebruik word. Een metode is etanolpresipitasie, wat die vermenging van yskoue etanol met die geskeide DNS-monster behels. DNA is onoplosbaar in alkohol en produseer daardeur 'n korrel as gevolg van die samevoeging van DNA-molekules. Natriumasetaat word in hierdie proses bygevoeg om die mate van neerslag te verhoog deur die ioniese sterkte te verhoog. Benewens etanol-presipitasieproses, kan fenol-chloroform-ekstraksieproses ook hiervoor geïnduseer word. In hierdie metode denatureer fenol die proteïene wat in die monster teenwoordig is. Sodra dit gesentrifuger is, sal gedenatureerde proteïene in die organiese fase bly terwyl die DNS-molekules wat met chloroform gemeng word in die waterfase teenwoordig sal wees. Chloroform sal die fenolreste verwyder. Sodra ekstraksie voltooi is, word DNA opgelos in TE-buffer of ultrasuiwer water gehou.
Wat is RNA-ekstraksie?
RNA-suiwering is 'n proses waardeur RNA uit 'n biologiese monster gesuiwer word. As gevolg van die teenwoordigheid van ribonuklease in die selle en weefsels, is hierdie proses ingewikkeld. Ribonuklease-ensiem het die vermoë om RNA vinnig af te breek. Die chemiese aard van ribonukleases is uiters stabiel, en dit is moeilik om hulle te deaktiveer. Neutralisering van die ribonukleases is 'n opsie. Aangesien hierdie ensiem alomteenwoordig in die selle en weefsels is, word spesiale tegnieke vir RNA-ekstraksie ontwikkel. Uit die baie metodes is die algemene metode Guanidinium tiosinaat-fenol-chloroform-ekstraksie.
Figuur 02: RNA-ekstraksie
Die Guanidinium-tiosinaat-fenol-chloroform-ekstraksiemetode hang af van sentrifugering en faseskeiding. Die mengsel wat sentrifugeer moet word, bestaan uit die waterige monster en 'n waterversadigde oplossing wat uit fenol en chloroform bestaan. Sodra dit gesentrifuger is, bestaan die oplossing uit 'n boonste waterfase en 'n onderste organiese fase onder neutrale pH-toestande (pH 7-8). RNA is teenwoordig in die waterfase. Die organiese fase bestaan tipies uit proteïene opgelos in fenol en lipiede opgelos in chloroform. 'n Chaotropiese middel ('n molekule wat die vermoë het om die waterstofbindings tussen watermolekules te breek) word bygevoeg; dit staan bekend as guanidiniumtiosianaat. Hierdie middel het die vermoë om proteïene te denatureer wat ribonukleases insluit wat RNA kan afbreek en betrokke is by sellise. Dit skei ook rRNA van ribosomale proteïene. Die laaste stap van RNA-suiwering is om die neerslag van die waterfase met etanol te was. RNA kan ook met vloeibare stikstof gesuiwer word.
Wat is die ooreenkomste tussen DNA- en RNA-ekstraksie?
- Albei ekstraksieprosesse gebruik skadelike chemikalieë soos fenol en chloroform.
- Sentrifugering is 'n noodsaaklike tegniek vir beide prosesse.
- Etanol word gebruik om die neerslag te was en om gesuiwerde DNA of RNA te verkry.
Wat is die verskil tussen DNA- en RNA-ekstraksie?
DNA vs RNA-ekstraksie |
|
| DNS-ekstraksie is 'n proses wat DNA uit 'n organisme of monster onttrek. | RNA-ekstraksie is 'n proses wat RNA uit 'n monster onttrek. |
| Step | |
| Die DNA-ekstraksieproses bestaan uit drie verskillende stappe met twee opsionele stappe. | Die RNA-ekstraksieproses bestaan uit vier verskillende stappe. |
| Reagens | |
| Surfaktiewe middels, proteases (opsioneel), alkohol, chloroform, fenol, natriumasetaat word vir DNA-ekstraksie gebruik. | Guanidiumtiosianaat, chloroform, fenol, etanol word vir RNA-ekstraksie gebruik. |
Opsomming – DNA vs RNA-ekstraksie
DNA- en RNA-ekstraksie is noodsaaklike aspekte van die eksperimentele prosedures vir die studie van molekulêre biologie, genetika en biotegnologie. Beide prosesse behels soortgelyke reagense, maar RNA-ekstraksie gebruik 'n spesiale reagens bekend as Guanidium thiocyanate wat die aktiwiteit van ribonukleases verminder. Dit is die hoofverskil tussen DNA- en RNA-ekstraksie.
Laai PDF-weergawe van DNA vs RNA-ekstraksie af
Jy kan die PDF-weergawe van hierdie artikel aflaai en dit vir vanlyn doeleindes gebruik soos per aanhalingsnota. Laai asseblief PDF-weergawe hier af Verskil tussen DNA- en RNA-ekstraksie
