Sleutelverskil – YAC vs M13 Phage Vector
DNA-kloning is 'n belangrike proses wat die voortplanting van belangrike DNA-fragmente van organismes moontlik maak. Dit vereis koppeling van spesifieke DNA met vektor-DNS om rekombinante DNA te skep wat in die gasheerorganisme transformeer. 'n Vektor is 'n DNA-molekule wat optree as 'n voertuig om vreemde genetiese materiaal na 'n ander sel of organisme in te dra. Dit moet in staat wees om binne die gasheerorganisme te repliseer en veelvuldige kopieë van rekombinante DNA te produseer. Daar is verskillende soorte vektore wat in DNA-kloning gebruik word. Gis kunsmatige chromosoom (YAC) en M13 faag vektor is twee tipes onder hulle. Die sleutelverskil tussen YAC- en M13-faagvektor is dat YAC 'n kunsmatige chromosoom is wat in gisselle repliseer, terwyl M13-faagvektor 'n enkelstrengige sirkelvormige DNA van bakteriofaag M13 is wat in E Coli-selle repliseer.
Wat is 'n YAC-vektor?
YAC is 'n kunsmatig geboude chromosoom wat die vermoë het om 'n groot segment van vreemde DNA te dra en binne die gisselle te repliseer. Dit het sentromeer, telomeer en outonoom repliserende volgordes wat noodsaaklik is vir replikasie en stabiliteit. YAC moet ook 'n selektiewe merker of merkers en beperkingsplekke dra om dit 'n effektiewe kloningsvektor te maak. Groot reekse wat wissel van 1000 kb tot 2000 kb kan in YAC ingevoeg word en na gis oorgeplaas word.
Figuur 01: YAC Vector
Wat is M13 Phage Vector?
Bakteriofage M13 is 'n virus wat infekteer en repliseer in E Coli. Die genoom van die M13-bakteriofaag is klein in grootte, ongeveer 6,7 kb. Dit is 'n enkelstrengige, sirkelvormige en positiewe sin-DNA. Hierdie virus infekteer spesifiek E Coli bakterieë deur F pilus. Sodra dit die ssDNA in die bakterie binnedring, sintetiseer dit sy komplementêre string en word dsDNA of die replikatiewe vorm (RF) van M13. RF kan optree soos 'n plasmied binne die gasheerorganisme. Die dsDNA repliseer binne E Coli en produseer ssDNA wat nuwe fage dra. Hierdie nuwe fage word voortdurend uit die E Coli vrygestel sonder om die gasheersel dood te maak. Die infeksie vertraag egter die groei van E Coli. dsDNA kan uit bakteriële selle onttrek word en as vektore in DNA-kloning gebruik word. Hulle staan bekend as M13-faagvektore. Hulle kan maklik gemanipuleer en op soortgelyke wyse as plasmiedvektore gebruik word.
Die inherente vermoë van infeksie van hierdie M13 fage dien as 'n goeie kwalifikasie om as 'n vektor in geenkloning gebruik te word. Wanneer M13 tot 'n vektor ontwikkel word, moet verskeie elemente in sy genoom geïnkorporeer word. Dit is 'n geen vir die lac-onderdrukker (lac I)-proteïen, die operateur-proksimale streek van die lac Z-geen, 'n lac-promotor en 'n meervoudige kloningsplek (poliskakelaar). Wanneer dsDNA van die M13 as vektore gebruik word, kan dit as 'n plasmiedvektor behandel word. Die gebruik van ssDNA M13 het egter voordele in DNA-volgordebepaling en plekgerigte mutagenese.
Aangesien M13-faagvektor veelvuldige kloningsplekke in lacZ-streek dra, kan herkombineerde vektore maklik geïdentifiseer word deur die blou/wit koloniesifting op agarplate wat IPTG en X-Gal bevat. Blou plate wat op die plate geproduseer word, bevat nie die herkombineerde fage nie. Daarom kan fage met insetsels gekies word vir die kloningsdoel.
Figuur 02: Bakteriofaag M13
Wat is die verskil tussen YAC en M13 Phage Vector?
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC is 'n geneties gemanipuleerde chromosoom wat die vermoë het om 'n groot segment van vreemde DNA te dra en binne die gisselle te repliseer. | M13-faagvektor is 'n virale vektor ontwikkel deur bakteriofaag M13 wat gebruik word om vreemde DNA in E Coli in te voeg. |
| Doel | |
| YAC's is ontwerp om groot fragmente van genomiese DNA in gis te kloneer. | M13-faagvektore word gebruik om vreemde DNA in E Coli in te voeg. |
| Invoeglengte | |
| YAC's kan megabasisgrootte genomiese insetsels bevat (1000 kb – 2000 kb). | Die grootte van insetsels is ongeveer 1 500 bps. |
| Konstruksie | |
| YAC DNA is moeilik om ongeskonde te suiwer en vereis 'n hoë konsentrasie vir die generering van YAC vektorstelsel. | Dit vind plaas via sikliese fotosintetiese elektronketting. |
| Stabiliteit | |
| YAC is onstabiel. | M13-fage kan maklik onttrek word. |
| Size | |
| Ensieme is groter molekules. | M13-fage is stabiel as YAC. |
Opsomming – YAC vs M13 Phage Vector
YAC is 'n kunsmatig gekonstrueerde vektorstelsel wat 'n spesifieke streek van gis-chromosoom gebruik om groot segmente van genetiese materiaal in gisselle in te voeg. M13-faagvektor is 'n vektorstelsel afgelei van bakteriofaag M 13 wat E coli as die gasheerorganisme gebruik. Dit is die belangrikste verskil tussen YAC en M13 Phage Vector. Albei is ewe nuttig in rekombinante DNA-tegnologie en geenkloning.
