Sleutelverskil – SDS-bladsy vs Western Blot
Western klad is 'n tegniek wat 'n spesifieke proteïen uit 'n proteïenmonster opspoor. Hierdie tegniek word uitgevoer via verskeie sleutelstappe: gelelektroforese, klad en hibridisasie. Natriumdodesielsulfaat-poliakrielamiedgelelektroforese (SDS Page) is 'n soort gelelektroforesetegniek wat gebruik word om proteïene volgens hul groottes (molekulêre gewigte) te skei. Western klad is 'n spesiale vel van 'n kladmembraan wat gebruik word om dieselfde patroon van die proteïene in die SDS-bladsy oor te dra. Die belangrikste verskil tussen SDS Page en western klad is dat SDS Page die skeiding van proteïene in 'n mengsel toelaat, terwyl western klad opsporing en kwantifisering van 'n spesifieke proteïen uit 'n mengsel moontlik maak. Albei is nuttig in proteïenontledingstudies.
Wat is SDS-bladsy?
SDS Page is 'n gelelektroforesetegniek wat vir proteïenskeiding gebruik word. Dit word algemeen gebruik in biochemie, genetika, forensika en molekulêre biologie. Sodra die proteïene uit die monster onttrek is, word dit uitgevoer op 'n jel wat uit SDS en poliakrielamied bestaan. SDS is 'n anioniese skoonmaakmiddel wat gebruik word om proteïene te lineariseer (denatureer proteïene) en om 'n negatiewe lading aan gelineariseerde proteïene te gee wat eweredig is aan hul molekulêre massa. Poliakrielamied word die soliede ondersteuning vir die gel. Gedenatureerde proteïene wat negatief gelaai is migreer na die positiewe kant van die apparaat deur die jel. Volgens die groottes van die proteïene verskil migrasiespoed tussen proteïene en vind skeiding plaas. Daarom is SDS-bladsy nuttig vir die skeiding van individuele proteïene gebaseer op hul groottes.
Die voorbereiding van die poliakrielamiedgel vir die fraksionering van proteïene is 'n deurslaggewende stap in SDS-bladsy. Die korrekte konsentrasie van poliakrielamied en die tipe kruisbindingsmiddel wat gebruik word, beïnvloed die fisiese eienskappe van die jel sterk, wat die werklike skeiding van die verskillende proteïene maak. Die poriegroottes van die gel moet behoorlik bestuur word vir effektiewe skeiding. SDS Page word egter as 'n hoë-resolusie-proteïenskeidingstegniek beskou.
SDS Bladsy-tegniek het 'n groot beperking in proteïenontleding. Aangesien SDS proteïene denatureer voor skeiding, laat dit nie die opsporing van ensiematiese aktiwiteit, proteïenbindingsinteraksies, proteïenkofaktore, ens toe nie.
Figuur 01: SDS-bladsy
Wat is Western Blot?
Western kladtegniek maak die opsporing van 'n spesifieke proteïen uit 'n proteïenmengsel en meting van die hoeveelheid en molekulêre gewig van die proteïen moontlik. Western klad is die membraan wat tydens die kladprosedure gebruik word om die spieëlbeeld van die proteïenpatrone in die SDS-poliakrielamiedgel te kry. Die membraan wat vir western klad gebruik word, bestaan meestal uit nitrosellulose of polivinielideendifluoried (PVDF). Die membraan met die oorgedra proteïen kan gebruik word om die verlangde proteïen te identifiseer. Dit benodig hoëgeh alte-teenliggaampies vir die opsporing van die verlangde proteïen deur hibridisasie. Die teenliggaam bind aan sy spesifieke antigeen en openbaar die teenwoordigheid van die verlangde antigeen wat 'n proteïen is.
Die oordrag van die proteïene vanaf die SDS-poliakrielamiedgel na die westelike klad word uitgevoer deur elektroblotting. Dit is 'n effektiewe en vinnige metode wat veroorsaak dat die proteïene uit die jel elektroforeseer en op die nitrosellulose membraan (western klad) beweeg.
Figuur 02: Western Blot
Wat is die verskil tussen SDS Page en Western Blot?
SDS Page vs Western Blot |
|
| SDS Page is 'n gelelektroforese-tegniek. | Western klad is 'n tegniek wat op 'n membraan uitgevoer word om 'n spesifieke proteïen uit 'n mengsel op te spoor. |
| Gebruik | |
| SDS-bladsy laat skeiding van proteïene volgens hul groottes toe. | Western klad laat die oordrag van proteïene op die SDS-bladsy-jel toe sonder om die patroon daarvan te verander en laat hibridisasie met spesifieke teenliggaampies toe. |
| Nadele | |
| Proteïendenaturering, hoë koste en teenwoordigheid van neurotoksienchemikalieë is die nadele van hierdie tegniek. | Hierdie tegniek is tydrowend en vereis 'n goeie ervare persoonlike en spesifieke beheerde toestande. |
Opsomming – SDS-bladsy vs Western Blot
SDS-bladsy en westelike klad is twee metodes wat by proteïenontleding betrokke is. SDS Page laat maklike skeiding van proteïene op 'n jel toe volgens hul molekulêre gewig. Western klad help om die teenwoordigheid en hoeveelheid van 'n spesifieke proteïen te bevestig deur hibridisasie met spesifieke teenliggaampies. Dit is die verskil tussen SDS Page en Western blot.
