Sleutelverskil – Verbygaande versus stabiele transfeksie
Transfeksie is 'n proses wat betrokke is by die geenoordrag van eukariotiese selle deur chemiese of fisiese metodes te gebruik. Transfeksie kan geklassifiseer word in hoof twee tipes genaamd verbygaande transfeksie en stabiele transfeksie. Tydens verbygaande transfeksie misluk die geen van belang om met die gasheergenoom te integreer nie en word dit vir 'n kort termyn tydelik binne die gasheer uitgedruk, terwyl, in stabiele transfeksie, die geen van belang met die gasheergenoom integreer en vir 'n lang termyn in verskeie generasies volgehou word.. Dit is die belangrikste verskil tussen verbygaande en stabiele transfeksie. In beide gevalle is transfeksie suksesvol, en gene word uitgedruk.
Wat is verbygaande transfeksie?
Transfeksie is 'n belangrike hulpmiddel vir die invoeging van gene in eukariotiese selle. Onder die twee tipes transfeksie is verbygaande transfeksie 'n algemene manier in geenoordrag. Deur 'n vektor word vreemde gene binne-in gasheerselle getransformeer. Sodra vreemde DNA die gasheersel binnegaan, het dit twee opsies. Dit kan óf met gasheergenoom integreer en repliseer, óf binne bly sonder om in die genoom te integreer. Verbygaande transfeksie vertoon die tydelike uitdrukking van die ingevoegde gene sonder om in die gasheergenoom te integreer. Gene druk en produseer die gekodeerde proteïen totdat die sel verdeel. Weens die onvermoë van integrasie kan dit egter nie repliseer en in toekomstige geslagte ingaan nie. Hierdie tipe transfeksie is suksesvol vir 'n kort tydperk. Tydens die seldeling of as gevolg van ander faktore, word vreemde DNA aan degradasie onderwerp. Verbygaande transfeksie word getoon wanneer die vreemde DNA in die vorm van hoogs opgerolde DNA is.
Figuur 01: Transient Transfection
Wat is stabiele transaksie?
Stabiele transfeksie toon suksesvolle vreemde geen-integrasie in gasheergenoom. Sodra vreemde DNA binne die gasheersel inkom, integreer 'n deel van die vreemde DNA met die gasheergenoom en word deel daarvan. Gevolglik repliseer vreemde DNA ook en gaan oor na toekomstige generasies wanneer die gasheergenoom repliseer. Hierdie tipe transfeksie is kompleks en skaars. As gevolg van die stabiele transfeksie in die genoom word hierdie eienskap egter vir 'n langer tydperk van verskeie generasies volgehou.
Stabiele transfeksie is 'n moeilike proses en vereis 'n effektiewe aflewering van DNS en selverkryging van die vreemde DNS in sy genoom. Lineêre DNA bevoordeel dus die stabiele transfeksie as sirkelvormige DNA. Stabiele transfeksietempo is egter ongeveer een uit 104 getransformeerde selle. Stabiele transfeksie kan waargeneem word deur die kotransformasie van 'n selekteerbare merker en die kunsmatige seleksie op 'n medium uit te voer.
Figuur 02: Stabiele transfeksie
Wat is die verskil tussen verbygaande en stabiele transfeksie?
Verbygaande versus Stabiele Transfeksie |
|
| Vreemde DNA integreer nie in 'n gasheergenoom nie. | Vreemde DNA integreer met gasheergenoom en word deel daarvan. |
| Replisering binne die gasheer | |
| Verbygaande getransfekteerde gene repliseer nie binne die gasheer nie. Daarom word gene nie na volgende generasies oorgedra nie. | Gene word binne die gasheer gerepliseer en aan toekomstige geslagte oorgedra. |
| Tydsduur van die geenuitdrukking | |
| Gene word uitgedruk vir 'n beperkte tydperk en daarna word hulle vernietig. | Gene word deel van die genoom en word vir 'n lang tydperk binne die generasie uitgedruk. |
| Gebruik | |
| Dit is nuttig om die uitwerking van korttermyn-uitdrukking van gene of geenprodukte te bestudeer. | Dit is nuttig om die effekte van geenuitdrukkings op lang termyn te bestudeer. |
| Opsporing van die transaksie | |
| Gene word uitgedruk en kan maklik opgespoor word deur 'n verslaggewergeen in te voeg. | Stabiele transfeksie kan maklik opgespoor word deur 'n kiesbare merker in te voeg en deur kunsmatige seleksie op media te kies. |
| Voorkoms en proses | |
| Verbygaande transfeksie is algemeen en nie kompleks om uit te voer nie. | Stabiele transfeksie kom selde voor en ingewikkeld om uit te voer. |
| Aard van DNA | |
| Hoogs-supergerolde DNA is geskik vir verbygaande transfeksie. | Lineêre DNA is geskik vir stabiele transfeksie. |
| Aansoeke | |
| Dit word gebruik vir studies van geen-afname of stilmaak met inhiberende RNA's, proteïenproduksie op 'n klein skaal | Dit word gebruik vir proteïenproduksie op grootskaalse, langtermyn farmakologiestudies, geenterapie, navorsing oor die meganismes van langtermyn genetiese regulering |
Opsomming – Transient vs Stabiele Transfection
Verbygaande en stabiele transfeksies is twee tipes transfeksies wat getoon word tydens die geen-oordrag na eukariotiese selle deur nie-virale gebaseerde stelsels. Getransformeerde vreemde DNA word nie geïntegreer met gasheergenoom in verbygaande transfeksie nie, terwyl dit met gasheergenoom in stabiele transfeksie integreer. Sirkelvormige opgerolde DNA word kortstondige transfeksie getoon, terwyl lineêre DNA stabiele transfeksie verkies. Dit is die verskil tussen verbygaande en stabiele transfeksie. Verbygaande transfeksie is egter meer algemeen en maklik in vergelyking met stabiele transfeksie. Maar die keuse van een uit twee hang af van die doel van die geenoordrag en duur van die navorsingsprojek.
