Die sleutelverskil tussen mikrokern- en komeettoets is dat mikronukleustoets belangrik is om chromosomale skade te kontroleer as gevolg van mutagene blootstelling, terwyl komeettoets belangrik is om primêre DNA-skade in individuele selle op te spoor.
Genotoksisiteitstoetse help om die moontlikhede van mutasies en chromosomale abnormaliteite te bepaal. Genotoksiene sluit chemiese stowwe en bestraling in. Karsinogene, mutagene en teratogene is die hoofkategorieë genotoksiene. Hulle veroorsaak verskeie skade soos puntmutasies, delesies, enkel- en dubbelstring-breuke, chromosomale afwykings, mikronuklei-formasies, DNA-herstel en selsiklus-interaksies. Sulke toestande kan lei tot 'n wye verskeidenheid siektes, en genotoksisiteittoetse voorkom die potensiële skade van hierdie toestande. Mikronukleustoets en komeettoets is twee tegnieke onder genotoksisiteittoetse.
Wat is mikronukleustoets?
Micronucleus-toets is 'n toets om chromosomale skade te bepaal as gevolg van mutagene blootstelling. Dit is belangrik in die sifting van chemikalieë wat spilvorming en mikrokerne veroorsaak. 'n Mikronukleus-toets verskaf inligting oor die stabiliteit van chemikalieë wanneer dit inmeng met chromosoomstruktuur en -funksie. Baie karsinogene toets positief in mikronukleustoetse. Die toetsproses behels 'n chemiese behandeling en die meting van die frekwensie van mikronukleêre selle. As daar 'n abnormale toename in die aantal mikrokernselle is, kom dit tot die gevolgtrekking dat die chemiese middel chromosomale skade veroorsaak.
'n Mikrokerntoets word gewoonlik uitgevoer op selle wat aktief verdeel. Daarom is eritrosiete en beenmurgstamselle wat deur seldelings geproduseer word ideale kandidate vir sulke toetse. Hulle ervaar 'n konstante en vinnige omset. Aangesien eritrosiete geen ware kerne het nie, maak dit mikrokernvormige selle meer sigbaar aan die einde van die toets.
Figuur 01: Mikronukleustoetswaarneming
Mikronukleustoetse is ekonomies, vinniger, gerieflik en vereis minder vaardighede om uit te voer. Hulle weerspieël chromosomale afwykings vinnig op 'n betroubare wyse en is uiters nuttig om chromosomale skade vinnig te bepaal. 'n Spesiale en veelsydige tipe mikronukleus-toets is die sitokineseblok-mikronukleus-sitoom (CBMNcyt)-toets. Dit is die voorkeur-toets om chromosomale skade en onstabiliteit in selle te meet. Die hoofprobleem van die gebruik van mikrokerntoets is egter dat dit nie in staat is om verskillende tipes chromosomale afwykings te bepaal nie, en die toets het 'n invloed op mitotiese tempo en proporsie van seldood, wat veroorsaak dat die resultate verander.
Wat is Comet Assay?
Comet-toets, wat ook bekend staan as enkelgel-elektroforesetoets, is 'n eenvoudige en sensitiewe tegniek om DNA-skade op te spoor. Dit meet die DNA-breuke in eukariotiese selle en is 'n standaardtegniek vir biomonitering en genotoksisiteitstoetsing.
Die komeettoets is betrokke by die inkapseling van selle in agarosesuspensies met 'n lae smeltpunt, lise van selle in neutrale of alkaliese toestande, en elektroforese van gesuspendeerde gelyseerde selle. Tydens die inkapselingsproses word die selle in gesmelte lae-smeltpunt agarose gesuspendeer, en die agarose vorm 'n matriks van koolhidraatvesels om hulle in plek te anker. Agarose is osmoties neutraal; daarom stel dit die oplossings in staat om deur die jel te penetreer en die selle te beïnvloed sonder om hulle te versteur en te verskuif. Die lisis-oplossing is 'n hoogs gekonsentreerde waterige soutoplossing en 'n skoonmaakmiddel. Hierdie sout ontwrig proteïene en die bindingspatrone binne die sel terwyl dit die RNA-inhoud van die sel ontwrig. Die selle vernietig, en alle proteïene, RNA, sitoplasmiese en nukleoplasmiese bestanddele, ontwrig en diffundeer in die agarosematriks in, wat die DNA verlaat.
Figuur 02: Komeettoets
Die elektroforese-oplossing is 'n alkaliese oplossing waar die DNA-dubbelheliks denatureer, en die nukleoïed word enkelstrengs. Tydens hierdie proses word 'n elektriese veld toegepas om die beelde te ontleed. Die beeldanalise meet die algehele intensiteit van die fluoressensie vir die DNA en nukleoïed en vergelyk die twee. Die algehele struktuur lyk soos 'n komeet met 'n sirkelvormige kop wat ooreenstem met die oorblywende onbeskadigde DNS en 'n stert vir die beskadigde DNS. Hoe helderder en langer die stert as gevolg van sterker seine, hoe hoër is die vlak van skade.
Wat is die ooreenkomste tussen mikrokern- en komeettoets?
- Micronucleus en die komeettoets is ekonomies, vinniger, gerieflik en vereis minder vaardighede.
- Hulle word hoofsaaklik op DNA uitgevoer.
- Albei toetse help om mutasies en chromosomale abnormaliteite te bepaal.
- Boonop gebruik beide tegnieke chemikalieë om die prosedure uit te voer.
Wat is die verskil tussen mikrokern- en komeettoets?
Die mikronukleustoets is belangrik om chromosomale skade te kontroleer as gevolg van mutagene blootstelling, terwyl komeettoets belangrik is om primêre DNA-skade in individuele selle op te spoor. Dit is dus die belangrikste verskil tussen mikrokern- en komeettoets. Die mikronukleus-toets is ook goed gevestig om klastogenisiteit en aneugenisiteit op te spoor. Die komeettoets word as 'n genotoksisiteitstoets gebruik om primêre DNA-skade in selle op te spoor. Boonop verskaf 'n mikronukleustoets inligting oor die stabiliteit van chemikalieë, terwyl 'n komeettoets 'n enkelselgelelektroforese is.
Die onderstaande infografika bied die verskille tussen mikrokern- en komeettoets in tabelvorm aan vir vergelyking langs mekaar.
Opsomming – Mikronukleus vs Comet Assay
Genotoksisiteitstoetse help om die moontlikhede van mutasies en chromosomale abnormaliteite te bepaal. Mikronukleustoets en komeettoets is twee tegnieke onder genotoksisiteittoetse. Mikronukleus-toets bepaal chromosomale skade as gevolg van mutagene blootstelling. Komeettoets is 'n eenvoudige en sensitiewe tegniek om DNA-skade op te spoor. Dit is dus die belangrikste verskil tussen mikrokern- en komeettoets. Mikronukleustoets is belangrik in die sifting vir chemikalieë wat spilvorming en mikrokerne veroorsaak. Komeettoets is betrokke by die inkapseling van selle in agarosesuspensies met 'n lae smeltpunt, lis van selle in neutrale of alkaliese toestande, en elektroforese van gesuspendeerde gelyseerde selle.
