Die sleutelverskil tussen kolorimetriese en fluorometriese toets is dat kolorimetriese toets die konsentrasie van gekleurde verbindings in 'n oplossing bepaal terwyl fluorometriese toets die kinetiese meganisme van 'n oplossing bepaal.
'n Biochemiese toets is 'n tegniek wat die aktiwiteit van 'n biologiese molekule of stof analities opspoor of kwantifiseer. Dit is 'n in vitro proses. Kolorimetriese toetse en fluorometriese toetse is twee tipes algemene biochemiese toetse wat in laboratoriums uitgevoer word. Veelvuldige tegnieke soos ELISA en Western blotting is ook komplekse biochemiese toetse vir die kwantifisering van metaboliese aktiwiteit en meting van die funksionele gedrag van biomolekules soos proteïene, ensieme en ander klein molekules. Hierdie tipe toetse word gebruik vir die identifikasie van proteïen-DNA, proteïen-RNA en proteïen-proteïen-interaksies.
Wat is 'n kolorimetriese toets?
'n Kolorimetriese toets is 'n tegniek wat die konsentrasie van gekleurde verbindings in 'n oplossing bepaal. Met ander woorde, kolorimetriese toets is 'n reaksie wat lei tot 'n kleurverandering as gevolg van 'n ensiematiese of chemiese reaksie tussen reagense en analiete. Kolorimetriese toetse word in biochemie beoefen om te toets vir ensieme, spesifieke verbindings, hormone, teenliggaampies en ander analiete. Hulle gebruik kolorimeters of spektrofotometers. Kolorimeters is instrumente wat gekleurde monsters kenmerk om 'n objektiewe maatstaf van kleureienskappe te verskaf. 'n Spektrofotometer is 'n toestel wat ligintensiteit meet as 'n funksie van die kleur of golflengte van die lig.
Figuur 01: Kolorimetriese toets
Hoe werk 'n kolorimetriese toets?
In 'n kolorimetriese toets word 'n bord voorberei met 'n spesifieke teenliggaam wat aan putte gebind is. Dan word die monster bygevoeg. Dit kan die monster toelaat om aan die teenliggaam te bind. Dan word 'n opsporing-teenliggaam en 'n substraat by die putte gevoeg om met die opsporingsondersoek te reageer. Stopoplossing word aan die einde voor die lesing bygevoeg. 'n Leë put wat die blanko genoem word, word sonder die monster gelaat. In die kolorimetriese toets, hoe donkerder die kleur, hoe groter is die analietkonsentrasie. Gewoonlik is slegs een golflengte nodig om die lesing te neem. Maar as daar 'n verwysingsmeting is, word twee of meer golflengtes gebruik.
Wat is 'n fluorometriese toets?
Die fluorometriese toets is 'n tegniek wat die kinetiese meganisme van ensiemreaksies bepaal. 'n Fluorometriese toets vind plaas met 'n vorming van 'n fluoresserende produk vanaf 'n nie-fluoresserende substraat of omgekeerd. Hierdie toets maak ook gebruik van fluoressensie-resonansie-energie-oordrag (FRET) waar die ensiematiese reaksie die posisie van twee fluorofore in die substraat verander en dus die fluoressensie-intensiteit verander.
Figuur 02: Fluorometriese Assay
Fluorometriese toetse is oor die algemeen baie meer sensitief as ander toetse. Die diagnostiese ensiemskattings in weefsel-, sel- of vloeistofmonsters van pasiënte neem toe as gevolg van die hoër sensitiwiteit daarvan.
Hoe werk 'n fluorometriese toets?
In 'n fluorometriese toets word 'n substraat by die monster in die plaat gevoeg, en die fluoressensie-respons word geneem met behulp van die plaatleser. Hier word elke sel afsonderlik gemeet. Ondeursigtige plate word in fluorometriese toetse gebruik. Dit verminder die verstrooiing van lig. Twee golflengtes is nodig vir hierdie tipe toets. Een golflengte is om die opwekking op te spoor en die ander golflengte is vir die emissie.
Wat is die ooreenkomste tussen kolorimetriese en fluorometriese toets?
- Colorimetriese toets en fluorometriese toets is twee tipes biochemiese toetse.
- Albei toetse word vir mediese diagnostiek uitgevoer.
- Hierdie toetse behels 'n ensiematiese reaksie.
- Albei toetse behels 'n substraat en analiete.
Wat is die verskil tussen kolorimetriese en fluorometriese toets?
'n Kolorimetriese toets is 'n tegniek wat die konsentrasie van gekleurde verbindings in 'n oplossing bepaal, terwyl fluorometriese toets 'n tegniek is wat die kinetiese meganisme van ensiemreaksies bepaal. Dus, dit is die belangrikste verskil tussen kolorimetriese en fluorometriese toets. Verder is die fluorometriese toetse meer sensitief as die kolorimetriese toetse; dus het fluorometriese toetse die vermoë om meer analiete op te spoor. Dit is dus nog 'n belangrike verskil tussen kolorimetriese en fluorometriese toets. Verder vereis fluorometriese toetse twee golflengtes, terwyl kolorimetriese toetse met een golflengte uitgevoer word.
Die onderstaande infografika tabelle meer verskille tussen kolorimetriese en fluorometriese toets.
Opsomming – Kolorimetriese vs Fluorometriese Assay
'n Biochemiese toets is 'n analitiese proses wat gebruik word om sellulêre metaboliese reaksies te bepaal en te kwantifiseer. Kolorimetriese toets en fluorometriese toets is twee tipes biochemiese toetse. Kolorimetriese bepaling is 'n reaksie wat lei tot 'n kleurverandering as gevolg van 'n ensiematiese of chemiese reaksie tussen reagense en analiete terwyl fluorometriese bepaling 'n tegniek is wat gebruik word om die kinetiese meganisme van ensiemreaksies te bepaal. Beide toetse is afhanklik van 'n ensiematiese reaksie wat 'n substraat en 'n analiet behels. Fluorometriese toetse is meer sensitief as kolorimetriese toetse. Die belangrikste is dat fluorometriese toetse twee golflengtes benodig, terwyl kolorimetriese toetse met slegs een golflengte uitgevoer kan word. Dus, dit som die verskil tussen kolorimetriese en fluorometriese toets op.
