Die sleutelverskil tussen RP HPLC en HIC is dat RP HPLC 'n meer polêre mobiele fase en 'n minder polêre stilstaande fase gebruik. Terwyl HIC 'n hidrofobiese stilstaande fase gebruik wat die hidrofobiese molekules toelaat om daaraan te heg.
Chromatografie is 'n analitiese tegniek wat help om 'n mengsel in sy komponente te skei. Eerstens moet ons die monster oplos om in 'n oplossing geskei te word. Hierdie oplossing-stofmengsel word die mobiele fase genoem. Dan word die mobiele fase deur 'n ander materiaal gevoer wat die stilstaande fase genoem word. Die stilstaande fase bepaal die skeiding van die komponente. Die skeiding vind plaas as gevolg van die verdeling van materiaal tussen die mobiele fase en die stilstaande fase.
Wat is RP HPLC?
Die term RP HPLC staan vir Reverse Phase High-Performance Liquid Chromatography. Dit behels die skeiding van komponente in 'n mengsel, volgens hidrofobisiteit. Die hidrofobiese komponente in die mobiele fase skakel met die geïmmobiliseerde hidrofobiese ligande op die stilstaande fase, terwyl hidrofiele komponente deur die stilstaande fase elueer sonder om aan die oppervlak van die stilstaande fase geheg te raak.
Figuur 01: HPLC-apparaat
Boonop het hierdie metode meer reproduceerbaarheid in vergelyking met ander chromatografiese tegnieke, en dit toon ook breë toepaslikheid. Daarom gebruik ons hierdie metode in laboratoriums vir meer as 75% van alle HPLC-metodes. Meeste van die tyd gebruik ons 'n waterige mengsel van water met 'n mengbare polêre organiese oplosmiddel as die mobiele fase. Dit sal dus die hegting van die hidrofobiese komponente in die oplossing aan die oppervlak van die stilstaande fase verseker.
Wat is HIC?
Die term HIC staan vir Hydrophobic Interaction Chromatography. Dit is 'n tipe omgekeerde fase HPLC, en hierdie metode word hoofsaaklik gebruik vir die skeiding van groot biomolekules soos proteïene. In hierdie metode moet ons 'n waterige medium gebruik om die monster van die biomolekule te maak. Dit is omdat organiese oplosmiddels denaturering van die proteïene kan veroorsaak. Boonop gebruik hierdie tegniek die interaksie tussen groot molekules met 'n effens hidrofobiese oppervlak van die stilstaande fase. Verder moet ons 'n hoë soutkonsentrasie in die monster gebruik omdat dit die proteïen aanmoedig om op die verpakking te behou; hierdie proses word uitsouting genoem. Deur die soutkonsentrasie geleidelik te verlaag, kan ons die biomolekules afsonderlik laat elueer volgens hul hidrofobisiteit.
Gewoonlik gebruik hierdie metode die toestande teenoor dié van ioonuitruilchromatografie. In hierdie tegniek moet ons eers 'n bufferoplossing deur die kolom stuur om die oplos van opgeloste stof in die monster te verminder. Dit laat die hidrofobiese gebiede van die proteïen blootstel. Wanneer die molekule egter meer hidrofobies is, is minder sout nodig om die binding te bevorder. Hier word die minder hidrofobiese opgeloste stowwe eerste geëlueer, en volgens die verandering in soutkonsentrasie word meer hidrofobiese opgeloste stowwe laaste geëlueer.
Wat is die verskil tussen RP HPLC en HIC?
Chromatografie is 'n analitiese tegniek vir die skeiding van komponente in 'n mengsel. RP HPLC en HIC is twee gespesialiseerde chromatografiese tegnieke. Die sleutelverskil tussen RP HPLC en HIC is dat RP HPLC 'n meer polêre mobiele fase en minder polêre stilstaande fase gebruik, terwyl HIC 'n hidrofobiese stilstaande fase gebruik, wat die hidrofobiese molekules toelaat om daaraan te heg.
Die onderstaande infografika som die verskil tussen RP HPLC en HIC op.
Opsomming – RP HPLC vs. HIC
Chromatografie is 'n analitiese tegniek vir die skeiding van komponente in 'n mengsel. RP HPLC en HIC is twee gespesialiseerde chromatografiese tegnieke. Die sleutelverskil tussen RP HPLC en HIC is dat RP HPLC 'n meer polêre mobiele fase en 'n minder polêre stilstaande fase gebruik, terwyl HIC 'n hidrofobiese stilstaande fase gebruik, wat die hidrofobiese molekules toelaat om daaraan te heg.
