Die sleutelverskil FPLC en HPLC is dat FPLC 'n tipe vloeistofchromatografie is wat groot biomolekules soos proteïene, nukleotiede en peptiede suiwer, terwyl HPLC 'n tipe vloeistofchromatografie is wat klein molekulêre gewig verbindings skei.
Vloeistofchromatografie is 'n tegniek wat gebruik word om 'n monster in sy individuele komponente te skei. Hierdie skeiding vind plaas as gevolg van die interaksie van spesifieke monsters met mobiele en stilstaande fases. Komponente binne 'n monster word geskei op grond van elke komponent se affiniteit vir die mobiele fase in vloeistofchromatografie. Soos die mobiele fase en monster deur 'n kolom gaan, begin die komponente van die monster in bande skei wat deur UV-VIS-spektroskopie opgespoor kan word. Daarom is FPLC en HPLC twee tipes vloeistofchromatografietegnieke.
Wat is FPLC?
FPLC is 'n tipe vloeistofchromatografie wat groot biomolekules soos proteïene, nukleotiede en peptiede suiwer. Die vinnige proteïenvloeistofchromatografie (FPLC) is vir die eerste keer in Swede ontwikkel en bemark deur Pharmacia-maatskappy in 1982. Dit word dikwels gebruik om proteïenmengsels te ontleed of te suiwer. Dit vind plaas gebaseer op die beginsel van monsterkomponente affiniteite vir bewegende vloeistof (mobiele fase) en 'n poreuse vaste materiaal (stasionêre fase). In FPLC is die mobiele fase 'n buffer, en die stilstaande fase is 'n hars wat uit krale bestaan. Dit bestaan gewoonlik uit kruisgebonde agarose wat in 'n silindriese glas- of plastiekkolom verpak is.
Figuur 01: FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) Apparaat
In die meeste van die FLPC-strategie word ioonuitruilhars gebruik. Daarom sal die proteïen van belang aan die hars bind deur 'n ladingsinteraksie. FLPC-tegniek gebruik ook twee buffers: buffer 1 (die lopende buffer) en buffer 2 (die elueringsbuffer). Aanvanklik, wanneer buffer en monstermengsel deur die kolom loop, sal die proteïen van belang in die mengsel aan die hars bind deur 'n ladingsinteraksie. Maar die proteïen van belang raak gedissosieer en keer terug na die oplossing in elueringsbuffer wanneer die elutiebuffer aan die einde van die proses deur die kolom loop. Later gaan die oplossing (eluent wat proteïen van belang bevat) deur twee detektors, wat soutkonsentrasie en proteïenkonsentrasie meet. Soos elke proteïen geëlueer word, verskyn dit as 'n "piek" tydens die opsporing en kan dit vir verdere gebruik versamel word.
Wat is HPLC?
HPLC is 'n tipe vloeistofchromatografie wat klein molekulêre gewig verbindings skei. In 1969 is die eerste HPLC kommersieel vervaardig deur Waters Corporation, VSA. In hoëprestasie vloeistofchromatografie (HPLC) word 'n monstermengsel (analiet) in 'n oplosmiddel (mobiele fase) deur 'n kolom gepomp met chromatografiese pakkingsmateriaal (stasionêre fase) teen hoë druk. Die monstermengsel word gedra deur 'n bewegende draergasstroom van helium of stikstof.
Figuur 02: HPLC (Hoogprestasie-vloeistofchromatografie)
Die komponente in die monstermengsel wat die minste interaksie met die stilstaande fase of die meeste interaksie met die mobiele fase het, sal die kolom vinniger verlaat. Aan die ander kant sal die komponente in die monstermengsel wat die meeste interaksie met die stilstaande fase of die minste hoeveelheid interaksie met die mobiele fase het, stadiger die kolom verlaat. Op grond van bogenoemde interaksiebeginsel kan die komponente van die monstermengsel geskei word. Boonop identifiseer die instrumentdetektor elke komponent van die monstermengsel wat die kolom verlaat. HPLC word gebruik om omgewings- en biologiese monsters te inspekteer vir die teenwoordigheid of afwesigheid van bekende verbindings, soos dwelms, gifstowwe of plaagdoders. Dit word in verskillende industrieë soos farmaseutiese, omgewings-, forensiese en chemikalieë gebruik.
Wat is die ooreenkomste tussen FPLC en HPLC?
- FPLC en HPLC is tipes vloeistofchromatografie.
- Albei word gebruik om biologiese monsters te skei en te identifiseer.
- Hulle het 'n vloeibare mobiele fase en 'n vaste stilstaande fase.
- Albei tegnieke gebruik 'n kolom om deur die monster te gaan.
- Hierdie tegnieke gebruik pompe, detektors, kleppe en sagteware vir monsterskeiding en opsporing.
Wat is die verskil tussen FPLC en HPLC?
FPLC is 'n tipe vloeistofchromatografie wat gebruik word om groot biomolekules soos proteïene, nukleotiede en peptiede te suiwer. HPLC is 'n tipe vloeistofchromatografie wat gebruik word om verbindings met 'n klein molekulêre gewig te skei. Dus, dit is die belangrikste verskil tussen FPLC en HPLC. Boonop gebruik FPLC pH- en geleidingsvermoëmonitors sowel as fraksieversamelaars. Daarteenoor gebruik HPLC nie pH- en geleidingsvermoëmonitors en fraksieversamelaars nie.
Die onderstaande infografika lys meer verskille tussen FPLC en HPLC in tabelvorm.
Opsomming – FPLC vs HPLC
Chromatografie is 'n laboratorium analitiese tegniek wat gebruik word vir die skeiding van komponente van 'n mengsel. Dit word in verskeie tipes verdeel soos kolomchromatografie, gaschromatografie, vloeistofchromatografie, ioonuitruilchromatografie, ens. FPLC en HPLC is twee tipes vloeistofchromatografietegnieke. FPLC is 'n tipe vloeistofchromatografie wat gebruik word om groot biomolekules soos proteïene, nukleotiede en peptiede te suiwer. Aan die ander kant is HPLC 'n tipe vloeistofchromatografie wat gebruik word om verbindings met klein molekulêre gewig te skei. Dit is dus die opsomming van wat die verskil tussen FPLC en HPLC is.
