Sleutelverskil – Direkte vs Indirekte ELISA
'n Ensiem-gekoppelde immunotoets (ELISA), ook bekend as ensiem-immunotoets, is 'n serologiese toets wat teenliggaampies in die bloed opspoor. Dit word gebruik as 'n diagnostiese hulpmiddel om uit te vind of die pasiënt aan 'n spesifieke tipe virus of 'n ander aansteeklike middel (antigeen) blootgestel is en of die liggaam teenliggaampies teen die infeksie geproduseer het. ELISA kan ook die vorige en huidige infeksies identifiseer. Daarom word ELISA dikwels as 'n voorsiftingstoets deur die dokters gebruik voor in-diepte ontleding van siektes. Hierdie toets kan in die laboratorium uitgevoer word deur 'n bloedmonster van die pasiënt te neem. Daar is twee tipes ELISA-toetse: direkte ELISA en indirekte ELISA. Die sleutelverskil tussen direkte en indirekte ELISA is dat indirekte ELISA meer sensitief is en die byvoeging van 'n sekondêre teenliggaam vereis, terwyl direkte ELISA minder sensitief is en slegs 'n primêre teenliggaam gebruik.
Wat is Direct ELISA?
ELISA is 'n siektediagnostiese toets wat uitgevoer word om die teenwoordigheid van bepaalde antigene of teenliggaampies in die bloed te identifiseer. Dit word as 'n plaattoets gedoen. Dit gebruik teenliggaampies wat gekoppel is aan ensieme wat maklik getoets kan word. Antigene se teenwoordigheid in die serummonster bind met spesifieke teenliggaampies wat met ensieme gekoppel is. In die laaste stap word 'n spesifieke substraat bygevoeg om met die ensiem te reageer. Die ensiem omskep die substraat in 'n gekleurde of seinproduserende produk. Die kleurverandering in die chemiese substraat openbaar die teenwoordigheid van 'n spesifieke teenliggaam in die serummonster. Direkte ELISA-toets gebruik slegs 'n primêre teenliggaam wat aan die ensiem gekoppel is. Wanneer dit aan die antigeen bind, verander dit vinnig die kleur, wat die teenwoordigheid van die aansteeklike middel in die bloed aandui. Die intensiteit van die seine is egter swakker in direkte ELISA aangesien die epitope beperk is tot binding van die antigene. Gevolglik is direkte ELISA minder sensitief in vergelyking met indirekte ELISA.
Figuur 01: Direkte ELISA-toets
Wat is indirekte ELISA?
ELISA kan uitgevoer word deur twee tipes teenliggaampies te gebruik, naamlik; primêre teenliggaampies en sekondêre teenliggaampies. Indirekte ELISA-instrument gebruik beide tipes teenliggaampies om die seine te versterk vir beter opsporing. Indirekte ELISA-tegniek word soos volg uitgevoer.
- Plate word met antigene geïnkubeer en gewas om nie-spesifieke binding te blokkeer.
- Dan word primêre teenliggaampies bygevoeg en gewas.
- Ensiemgekoppelde sekondêre teenliggaampies word bygevoeg en gewas.
- 'n Substraat word bygevoeg en toegelaat om met ensieme te reageer.
- Seine word opgespoor, en die teenwoordigheid of afwesigheid van die spesifieke antigeen in die monster word geïdentifiseer.
In indirekte ELISA-toets kan verskeie sekondêre teenliggaampies aan 'n enkele primêre teenliggaam bind. Sekondêre teenliggaampies word gekoppel aan ensieme wat maklik getoets kan word. Daarom kan een binding 'n sterk sein maak as gevolg van meer as een interaksies. Gevolglik is indirekte ELISA meer sensitief as direkte ELISA. Indirekte ELISA kan egter nie-spesifieke seine maak as gevolg van kruisreaksies van die sekondêre teenliggaampies.
Figuur 02: Indirekte ELISA-toets
Wat is die verskil tussen Direkte en Indirekte ELISA?
Direkte vs Indirekte ELISA |
|
| Direkte ELISA is minder sensitief in vergelyking met indirekte ELISA. | Indirekte ELISA is meer sensitief. |
| Tyd geneem | |
| Direkte ELISA-toets is 'n vinnige proses. | Indirekte ELISA is tydrowend. |
| Gebruik van teenliggaampies | |
| Slegs een tipe teenliggaampies (Primêre teenliggaampies) word in direkte ELISA gebruik. | Primêre en sekondêre teenliggaampies word vir indirekte ELISA gebruik. |
| Skakel met ensieme | |
| Primêre teenliggaampies word met ensieme gekoppel. | Sekondêre teenliggaampies word met ensieme gekoppel. |
| Kruisreaktiwiteit van tweede teenliggaampies | |
| Direkte ELISA skakel die kruisreaktiwiteit van tweede teenliggaampies uit. | Indirekte ELISA word geaffekteer met kruisreaktiwiteit van tweede teenliggaampies. |
| Seine | |
| Seine is swak in vergelyking met indirekte ELISA. | Seine word in indirekte ELISA versterk. Dit is dus maklik om op te spoor. |
Opsomming – Direkte vs Indirekte ELISA
ELISA is 'n biochemiese tegniek wat hoofsaaklik in immunologie gebruik word om die teenwoordigheid van 'n teenliggaam of 'n antigeen in 'n bloedmonster van 'n pasiënt op te spoor. Dit kan uitgevoer word deur twee prosesse bekend as direkte of indirekte ELISA. Direkte ELISA-toets gebruik slegs primêre teenliggaampies om die antigeen op te spoor, terwyl indirekte ELISA beide primêre en sekondêre teenliggaampies gebruik. In direkte ELISA word primêre teenliggaampies gemerk terwyl in indirekte ELISA sekondêre teenliggaampies gemerk is. Dit is die verskil tussen direkte en indirekte ELISA.
