Die sleutelverskil tussen Golden Gate en Gibson Assembly is dat Golden Gate staatmaak op die teenwoordigheid van beperkingsterreine binne 'n spesifieke volgorde wat gekloon moet word, terwyl Gibson Assembly nie staatmaak op die teenwoordigheid van beperkingsterreine binne 'n spesifieke volgorde om gekloon word.
Oor die afgelope dekades het molekulêre wetenskaplikes verskeie gestandaardiseerde prosedures ontwikkel wat die makliker samestelling van veelvuldige DNS-fragmente in 'n enkele stuk moontlik maak. Daarom word kloningsmetodes soos Restriction Enzyme Ligation, Gateway Cloning, Gibson Assembly, Golden Gate Assembly en TOPO-kloning wyd deur navorsers in wetenskaplike eksperimente gebruik. Daarom is Golden Gate en Gibson Assembly twee molekulêre kloningsmetodes wat die samestelling van veelvuldige DNS-fragmente in 'n enkele stuk moontlik maak.
Wat is Golden Gate Assembly?
Golden Gate is 'n molekulêre kloningsmetode wat die samestelling van veelvuldige DNS-fragmente in 'n enkele stuk vergemaklik. Hierdie metode maak staat op die teenwoordigheid van beperkingsplekke binne 'n spesifieke volgorde wat gekloon moet word. Dit het ontstaan in 1996. Hierdie tegniek gebruik Tipe IIS-beperkingsensieme en T4 DNA-ligase. Hierdie ensieme sny DNA buite die herkenningsplekke. Hulle kan nie-palindromiese oorhange skep. Daarom kan veelvuldige fragmente van DNS saamgestel word deur kombinasies van oorhangreekse te gebruik.
Figuur 01: Golden Gate
Golden Gate-samestellingsprosedure
Golden Gate-tegniek het drie hoofstappe in sy prosedure:
- skepping van oorhange in die kloningsvektor,
- samestelling van veelvuldige DNA-insetsels deur gebruik te maak van fragmentspesifieke rye in oorhange, en
- ligation.
Golden Gate-samestelling gebruik sirkelvormige kloningsvektore (bestemmingsvektor). Verder, in hierdie metode, word die beperkingsplek uit die geligeerde produk uitgeskakel om vertering en afbinding gelyktydig uit te voer. 'n Tipiese termiese siklusprotokol vir Golden Gate ossilleer tussen 37 °C en 16 °C omdat 37 °C optimaal is vir beperkingsensieme en 16 °C is optimaal vir ligases.
Wat is Gibson Assembly?
Gibson Assembly is 'n molekulêre kloningsmetode wat die samestelling van veelvuldige DNS-fragmente in 'n enkele stuk moontlik maak. Anders as die Golden Gate-metode, maak hierdie metode nie staat op die teenwoordigheid van beperkingsplekke binne 'n spesifieke volgorde wat gekloon moet word nie. Dit is gevind deur Daniel G. Gibson van die J. Craig Venter Instituut. Hierdie tegniek is 'n tipe volgorde en ligase onafhanklike kloning (SLIC) metode.
Figuur 02: Gibson Assembly
Gibson-samestellingsprosedure
Gibson Assembly benodig DNS-fragmente wat 20-40 basispare bevat wat met aangrensende DNS-fragmente oorvleuel. Oorvleuelings word bygevoeg via PCR. Dan word hierdie DNS-fragmente by die Gibson-masermengsel gevoeg wat drie ensieme het. Hierdie prosedure word uitgevoer onder isotermiese toestande (50 °C vir 1 uur) deur gebruik te maak van drie verskillende ensieme: eksonuklease, DNA-polimerase en DNA-ligase. Die eksonuklease kou DNA van die 5'-punt terug. Dit inhibeer dus nie polimerase-aktiwiteit nie en laat die reaksie in een enkele proses voort. Die gevolglike enkelstrengige streke op aangrensende DNA-fragmente kan uitgegloei word as gevolg van oorvleuelende volgordes. DNA-polimerase vul die gapings op deur nukleotiede by te voeg. Laastens verbind die DNA-ligase kovalent by die DNA van aangrensende segmente. Normaalweg gebruik Gibson Assembly gelineariseerde bestemmingsvektore. Boonop kan hierdie metode gelyktydig tot 15 DNA-fragmente kombineer gebaseer op volgorde-ooreenkoms.
Oorgelykhede tussen Golden Gate en Gibson Assembly
- Golden Gate en Gibson Assembly is twee molekulêre kloningsmetodes.
- Albei metodes kan veelvuldige DNS-fragmente in 'n enkele stuk saamstel.
- Hierdie metodes gebruik bestemmingsvektore.
- Albei metodes gebruik termiese fietsryers vir die samestelling van veelvuldige DNA-fragmente.
- Hulle word gebruik in werfgerigte mutagenese.
Verskil tussen Golden Gate en Gibson Assembly
Golden Gate is 'n molekulêre kloningsmetode wat gebruik word in die samestelling van veelvuldige DNA-fragmente in 'n enkele stuk wat staatmaak op die teenwoordigheid van beperkingsplekke binne 'n spesifieke volgorde wat gekloon moet word, terwyl Gibson Assembly 'n molekulêre kloningsmetode is wat in die samestelling van veelvuldige DNA-fragmente in 'n enkele stuk sonder om staat te maak op die teenwoordigheid van beperkingsplekke binne 'n spesifieke volgorde wat gekloon moet word. Dit is die belangrikste verskil tussen Golden Gate en Gibson Assembly. Verder gebruik Golden Gate-metode 'n sirkelvormige bestemmingsvektor, terwyl Gibson Assembly-metode 'n gelineariseerde bestemmingsvektor gebruik.
Die volgende infografika tabelle die verskil tussen Golden Gate en Gibson Assembly.
Opsomming – Golden Gate vs Gibson Assembly
Molekulêre kloning is 'n metode wat gebruik word om rekombinante DNA-molekules saam te stel en hul replikasie binne gasheerorganismes te rig. Golden Gate en Gibson Assembly is twee molekulêre kloningsmetodes wat die samestelling van verskeie DNA-fragmente in 'n enkele stuk moontlik maak. Die Golden Gate-metode maak staat op die teenwoordigheid van beperkingsplekke binne 'n spesifieke volgorde wat gekloon moet word, terwyl Gibson Assembly nie staatmaak op die teenwoordigheid van beperkingsplekke binne 'n spesifieke volgorde wat gekloon moet word nie. Dit is dus die sleutelverskil tussen Golden Gate en Gibson Assembly.
