Sleutelverskil – Gelelektroforese vs SDS-bladsy
Gelelektroforese is 'n tegniek wat makromolekules in 'n elektriese veld skei. Dit is 'n algemene metode in molekulêre biologie om DNA, RNA en proteïene van mengsels te skei volgens hul molekulêre groottes. SDS Page is 'n tipe gelelektroforese wat gebruik word om proteïene van 'n proteïenmengsel te skei op grond van hul groottes. Gelelektroforese is 'n term wat gebruik word om te verwys na die normale tegniek wat vir DNA, RNA en proteïenskeiding toegepas word, terwyl SDS Page 'n een tipe gelelektroforese is. Dit is die belangrikste verskil tussen gelelektroforese en SDS Page.
Wat is gelelektroforese?
Gelelektroforese is 'n algemene tegniek wat in laboratoriums gebruik word om gelaaide molekules soos DNA, RNA, proteïene, ens. van hul mengsels te skei. 'n Jel word gebruik in gelelektroforese. Dit dien as 'n molekulêre sif. Daar is twee tipes gels wat in gelelektroforese gebruik word, naamlik agarose en poliakrielamied. Seleksie van 'n gel en gel-preparaat is belangrike faktore wat in ag geneem moet word by gelelektroforese, aangesien die poriegrootte van die gel versigtig gemanipuleer moet word vir 'n goeie skeiding van molekules deur gelelektroforese. Gelelektroforese het 'n elektriese veld wat aan twee punte van die gel gekoppel is. Die een kant van die jel toon 'n positiewe lading terwyl die ander kant negatief gelaai is.
DNA en RNA is negatief gelaaide molekules. Sodra hulle vanaf die negatiewe kant van die jel in die jel gelaai en op die elektriese veld toegedien is, migreer hulle deur die jelporieë na die positief gelaaide kant van die jel. Die spoed van die migrasie hang af van die lading en die grootte van die molekule. Kleiner molekules migreer maklik deur die jelporieë as groter molekules. Gevolglik reis kleiner molekules 'n lang afstand deur die jel en die groter molekules reis 'n kort afstand. Om die beweging van molekules op die gel waar te neem, word spesiale tipes kleurstowwe gebruik. Die elektriese veld word vir 'n sekere tydperk toegepas en gestop om die verlies van molekules te voorkom en om die molekules op hul gereisde posisies te hou. Verskillende bande kan in die jel waargeneem word. Hierdie bande verteenwoordig die molekules van verskillende groottes. Gevolglik is gelelektroforese nuttig om molekules volgens hul groottes te onderskei.
Gelelektroforese word in verskeie tegnieke geïnkorporeer as 'n voorbereidende tegniek in molekulêre biologie soos PCR, RFLP, kloning, DNA-volgordebepaling, suidelike klad, genoomkartering, ens.
Figuur 01: Agarose-gelelektroforese
Wat is SDS-bladsy?
Natriumdodesielsulfaat-poliakrielamiedgelelektroforese (SDS-bladsy) is 'n tipe gelelektroforese wat gebruik word om proteïene te skei. Wanneer gelelektroforese gebruik word om proteïene te skei, is spesiale behandelings nodig aangesien proteïene nie negatief gelaai is soos DNA en RNA nie en nie na die positiewe kant of negatiewe kant toe migreer nie. Gevolglik word proteïene gedenatureer en bedek met 'n negatiewe lading voor gelelektroforese. Dit word gedoen met 'n skoonmaakmiddel genaamd natriumdodesielsulfaat (SDS). Die gelelektroforese wat SDS en 'n poliakrielamiedgel vir die ondersteunende medium gebruik, staan bekend as SDS Page. Hierdie tegniek word algemeen in biochemie, genetika, forensika en molekulêre biologie gebruik.
Tydens SDS-bladsy word proteïene met SDS gemeng. SDS ontvou proteïene in 'n lineêre vorm en bedek hulle met 'n negatiewe lading wat eweredig is aan hul molekulêre massa. As gevolg van die negatiewe lading migreer proteïenmolekules na die positiewe ladingkant van die gel en skei volgens hul molekulêre massas. In SDS Page word poliakrielamied gebruik as die vaste ondersteuning vir die jel. Die werklike skeiding van die proteïene hang hoofsaaklik af van die eienskappe van die jel. Gevolglik moet poliakrielamied gel voorbereiding noukeurig gedoen word en korrekte konsentrasies van poliakrielamied moet gebruik word. Poliakrielamiedgels toon hoë resolusie as agarosegels. Daarom word SDS Page as 'n hoë-resolusie tegniek vir proteïenskeiding beskou.
SDS Page is 'n tipe denaturerende gelelektroforese. Dit het 'n groot beperking in proteïenontleding. Aangesien SDS proteïene denatureer voor skeiding, laat dit nie die opsporing van ensiematiese aktiwiteit, proteïenbindingsinteraksies, proteïenkofaktore, ens toe nie.
Figuur 02: SDS-bladsy
Wat is die verskil tussen gelelektroforese en SDS-bladsy?
Gel Electroforese vs SDS Page |
|
| Gelelektroforese is 'n metode wat uitgevoer word om makromolekules te skei deur 'n elektriese veld te gebruik. | SDS Page is 'n hoë-resolusie gelelektroforese tegniek wat gebruik word om proteïene te skei op grond van hul massa. |
| Gel Run | |
| Dit kan op 'n horisontale of vertikale wyse uitgevoer word. | SDS Bladsy loop altyd vertikaal. |
| Basis vir skeiding | |
| Skeiding vind plaas volgens die lading en grootte. | Proteïenskeiding vind plaas volgens die massa en lading. |
| Resolusie | |
| Agarosegelelektroforese het lae resolusie en poliakrielamiedgelelektroforese het 'n hoër resolusie | SDS-bladsy het 'n beter resolusie. |
| Denaturation | |
| Gelelektroforese sluit beide denaturerende en nie-denaturerende tegnieke in. | SDS Page denatureer proteïene voor skeiding. |
Opsomming – Gelelektroforese vs SDS-bladsy
Gelelektroforese is 'n algemene tegniek wat gebruik word vir skeiding en ontleding van DNA, RNA en proteïene gebaseer op hul grootte en lading. Daar is twee hooftipes gelelektroforese, naamlik agarosegelelektroforese en poliakrielamiedgelelektroforese. Agarose-gels word hoofsaaklik vir nukleïensuurskeiding gebruik; wanneer hoër resolusie vereis word, word poliakrielamiedgels gebruik. SDS Page is 'n tipe gelelektroforese wat algemeen gebruik word om komplekse mengsels van proteïene te skei. Dit word beskou as 'n hoë-resolusie proteïen skeiding tegniek. Dit is die verskil tussen gelelektroforese en SDS-bladsy.
