Die sleutelverskil tussen chromatofokusering en iso-elektriese fokusering is dat chromatofokusering 'n tipe kolomchromatografiemetode is wat ioonuitruilharse gebruik terwyl iso-elektriese fokusering 'n tipe elektroforesetegniek is wat geïmmobiliseerde pH-gradiëntgels gebruik.
Chromatofokusering en iso-elektriese fokusering is twee tegnieke wat proteïene skei volgens hul iso-elektriese punte. Beide chromatofokusering en iso-elektriese fokusering het groot oplosvermoë. Chromatofokusering is 'n hoë-resolusie kolomchromatografiemetode terwyl iso-elektriese fokusering 'n elektroforetiese skeidingsmetode is. Boonop gebruik chromatofokusering nie 'n elektriese veld nie, terwyl iso-elektriese fokusering 'n elektriese veld benodig.
Wat is Chromatofokusering?
Chromatofokusering is 'n tipe hoë-elueringchromatografie wat proteïene skei volgens verskille in hul iso-elektriese punt. Dit gebruik 'n ioonuitruilharskolom en 'n intern ontwikkelde pH-gradiënt. Anders as iso-elektriese fokusering, behels chromatofokusering nie 'n elektriese veld nie. Chromatofokusering is 'n kragtige suiweringstegniek wat hoogs soortgelyke molekules kan oplos wat selfs net met 0,02 pH-eenhede verskil. Daarom is chromatofokusering die beste geskik as 'n finale poleerstap wanneer hoë resolusie vereis word om baie soortgelyke komponente te skei.
In chromatofokusering word die monster op die kolom toegedien deur dit met die beginbuffer te meng. Proteïene wat by 'n pH bo hul iso-elektriese punt is, is negatief gelaai en hulle bly naby die bokant van die kolom terwyl ander proteïene wat by die pH onder hul iso-elektriese punt is, in die kolom af migreer. Die proteïen met die hoogste iso-elektriese punt word eerste geëlueer terwyl die proteïen met die laagste iso-elektriese punt laaste uit die kolom geëlueer word. Hierdie tegniek word beïnvloed deur verskeie faktore soos proteïenpresipitasie en lineariteit van die pH-gradiënt.
Wat is iso-elektriese fokus?
Iso-elektriese fokus is 'n tegniek wat verskillende molekules skei op grond van hul iso-elektriese punt. Dit staan ook bekend as elektrofokusering. Hierdie tegniek word dikwels gebruik vir proteïenskeiding in 'n jel. In iso-elektriese fokusering word die monster in geïmmobiliseerde pH-gradiënt (IPG) gels gevoeg. IPG-gel is 'n akrielamiedgelmatriks wat met 'n pH-gradiënt gekopolimeriseer is. Die proteïene migreer na die katode totdat hulle die pH-gebied van hul iso-elektriese punte vind. Wanneer 'n proteïen die pH bereik wat geen netto lading het nie, hou migrasie op en gee 'n stilstaande band. Net so gee elke proteïen 'n band by 'n punt in die pH-gradiënt wat ooreenstem met sy iso-elektriese punt.
Figuur 01: Iso-elektriese fokus
Iso-elektriese fokusering is die eerste stap van tweedimensionele gelelektroforese. In daardie tegniek word proteïene eers geskei volgens hul iso-elektriese punte deur iso-elektriese fokus en dan geskei deur hul molekulêre gewig deur SDS-PAGE.
Wat is die ooreenkomste tussen chromatofokusering en iso-elektriese fokusering?
- Chromatofokusering en iso-elektriese fokusering is twee hoogs oplossende metodes.
- Albei is gebaseer op die iso-elektriese punt van proteïene.
- Hierdie tegnieke gebruik 'n pH-gradiënt.
- Albei prosedures is insiggewend vir die karakterisering van menslike hemoglobienvariante.
- Hulle kan molekules oplos waar pI-waardes met so min as 0,02 pH-eenhede verskil.
Wat is die verskil tussen chromatofokusering en iso-elektriese fokus?
Chromatofokusering is 'n hoë-resolusie kolomchromatografie tegniek wat proteïene skei volgens hul iso-elektriese punt. Daarenteen is iso-elektriese fokusering 'n elektroforetiese tegniek wat proteïene skei volgens hul iso-elektriese punt deur die toepassing van 'n elektriese veld langs 'n pH-gradiënt wat in 'n kapillêre gevorm word. So, dit is die sleutelverskil tussen chromatofokusering en iso-elektriese fokusering.
Nog 'n verskil tussen chromatofokusering en iso-elektriese fokusering is dat chromatofokusering nie 'n elektriese veld behels nie, terwyl iso-elektriese fokusering 'n elektriese veld benodig.
Opsomming – Chromatofokusering vs Iso-elektriese fokus
Chromatofokusering en iso-elektriese fokusering is twee soortgelyke tegnieke wat 'n hoë oplosvermoë van molekules het, veral baie soortgelyke molekules. Chromatofokusering is 'n hoë-resolusie kolomchromatografietegniek terwyl iso-elektriese fokusering 'n elektroforesemetode is. Chromatofokusering behels nie 'n elektriese veld nie, anders as iso-elektriese fokusering. Dit som dus die verskil tussen chromatofokusering en iso-elektriese fokusering op.
